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        求助小鼠颅骨成骨细胞提取

        相关实验:大鼠乳鼠成骨细胞培养实验

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        dxy_3en2kxp6

        看了文献的方法,尝试了很多次,都提不出细胞。有没有大神可以指点指点,非常感谢。实验步骤如下,

        新生小鼠颅骨成骨细胞的分离培养

        1.斩首 20-30 只新生小鼠幼崽。

        2.用乙醇喷洒消毒。

        4.从脖子后部到鼻子的弧形切割皮肤。

        5.用剪刀剪下颅盖骨,置于培养皿中。

        6.刮掉颅盖上的软组织。

        7.培养皿中加入含双抗的培养基清洗组织,重复3次。

        8.用胰蛋白酶在37℃下孵育10分钟,重复2次。

        9.用剪刀将颅骨碎成小块(1 mm3 块)。

        10.加入消化液在37℃下孵育30分钟。

        消化液:-α-MEM

        - 0.2%Ⅰ型胶原酶

        - 0.1 % trypsin/EDTA

        11.换新鲜的消化液37℃下孵育60分钟。

        12. 将溶液转移到15毫升管中。

        13.在室温下以1,500×g离心细胞溶液5分钟。丢弃上清液并将细胞沉淀重悬于MEM中。

        14.加入20毫升MEM至2个T75。 

        15.培养瓶孵育在37℃/ 5%CO2。

         
         
         
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        4 个回答

        user-title

        此用户已注销

        有帮助

        你好,请问你成功提取出来了吗。

        user-title

        晴空a

        有帮助

        目前常用的获取成骨细胞方法主要有:新生动物机械分离法、全骨髓诱导法、外周血/骨髓单核细胞诱导法和脾细胞诱导法。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        消化液首次消化时间可以减短点,另外可以添加裂解酶。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        以下是可能有帮助的建议:

        在消化液的配制过程中,确保使用新鲜的胶原酶和胰蛋白酶/EDTA,以确保酶的活性。

        在颅骨碎片消化期间,可以将消化液中的骨片悬浮,以便更好地消化组织。

        确保消化时间的准确性,如果消化时间过短,则细胞可能无法从骨组织中释放出来,如果消化时间过长,则细胞可能被过度消化,影响细胞的健康和数量。

        如果您在培养细胞时使用了含有双抗的培养基,可以尝试使用不含双抗的培养基来提高细胞的存活率和增殖率。

        在分离和培养过程中,应该使用无菌的技术,并在培养期间经常更换新鲜的培养基。

        最后,尝试调整实验步骤中的某些参数,例如消化液的浓度、时间和温度,以及细胞的离心速度和时间,以优化细胞的提取和培养。

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