实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问磁珠分选可以选什么细胞？？毕业论文无头绪，请大佬们指点

土井挞克树

细胞都可以，只要是有免疫作用位点，可以孵化抗体就可以

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问请问有没有通过诱导巨噬细胞极性，从而治疗干眼症的？有没有相关文献支持？

土井挞克树

可以的，一般都是诱导M2型巨噬细胞治疗干眼症

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问小鼠脑组织如何制作石蜡切片?

loveliufudan

制备小鼠脑组织石蜡切片的基本步骤如下：固定组织：用4%的中性缓冲福尔马林固定小鼠脑组织，通常固定时间为24-48小时。脱水：将固定后的组织在梯度酒精中脱水，通常使用70%、80%、95%和100%的乙醇，每个酒精中浸泡时间一般为30分钟至1小时，最后用两次100%乙醇浸泡1小时以确保脱水彻底。渗透：将脱水后的组织用二甲苯（或其他透明剂）浸泡，浸泡时间一般为1-2小时，直到组织完全透明。浸渍：将透明

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问蛋白质N端含有甲硫氨酸为什么蛋白质诱导不出来

土井挞克树

因为甲硫氨酸在自然过程中会被切割掉，所以有甲硫氨酸的蛋白诱导不出来

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问造GVHD小鼠模型后第7天，小鼠精神状不好，体重突然下降，解剖时发现肝脏变白，肾变白，肠道水肿有血液渗出，请问是GvHD引起么

是TTT

GVHD主要表现在皮肤肝脏肠道，你描述的很像GVHD的表现

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问BMMY培养基诱导添加甲醇量的确定

是TTT

建议预实验可以用多个不同浓度的甲醇:0.5%、1%、1.5%等等去诱导，每隔24h添加甲醇至初始浓度。甲醇浓度测定有酶电极法，气相色谱法，亚硫酸品红比色法，所用仪器较昂贵，有条件可以使用。没有条件可以考虑醇氧化酶－过氧化氢酶联合酶促法。

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问小鼠粪便潜血实验

sswei

竹签挑取少许粪便于白瓷板、玻片或滤纸上，滴加邻-甲苯胺冰乙酸溶液2-3滴，再加过氧化氢溶液2-3滴，混匀后立即观察结果。也可用棉签涂取少许粪便，然后将邻-甲苯胺冰乙酸溶液和过氧化氢溶液直接滴加在棉签上，立即观察结果。【结果判断】++++：加入试剂后立即出现黑蓝色。+++：加入试剂后立即出现蓝褐色。++：加入试剂后初显浅蓝色，逐渐呈明显蓝褐色。+：加入试剂lOs后，初显浅蓝色渐变为蓝色。-：加入试剂

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问CAR-T细胞总是聚团生长

sswei

一般可以从以下几个方面分析：1、消化的过程可能过于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太强或有毒性等会导致细胞死亡。细胞死亡后会释放出DNA，缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团。2、细胞离心速度过大或时间太长，也容易造成细胞抱团。3、消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难。4、悬浮细胞培养摇瓶、状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱团生长的情况（比

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问从骨组织提取RNA，求浓度大概为多少

土井挞克树

提取的骨组织RNA浓度一般在0.80～0.90g/L

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问果蝇杂交实验如何改善仪器操作和实验步骤

loveliufudan

以下是一些可以改善果蝇杂交实验的仪器操作和实验步骤的建议：实验前准备：果蝇繁殖和培养条件的优化是成功进行果蝇杂交实验的重要前提。建议在保持果蝇菌种纯度和品质的同时，采用良好的繁殖和培养方法，如调整培养基的配方、温度和光照条件等，以提高果蝇的生长和繁殖率。实验仪器：在进行果蝇杂交实验时，使用高质量、易于操作的显微镜和微操作器材是非常重要的。建议使用分辨率高、对比度好的显微镜，以便观察果蝇的各种特征。

3 回答1536 围观

问果蝇杂交实验需要把握的关键环节

sswei

果蝇杂交实验的成功与否的关键有:1.理解昆虫的发育过程。2.生物的性别决定。3.基因的显性和隐性。4.基因在亲子代之间传递的特点

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问求助过氧化氢损伤模型建立

loveliufudan

建立心肌细胞损伤模型时，过氧化氢的浓度和作用时间需要根据具体实验条件和研究目的进行优化。下面提供一些常用的实验条件供参考：过氧化氢浓度：通常在0.1 mM到1 mM范围内进行优化。一般而言，过氧化氢浓度越高，心肌细胞受损越严重，但过高的浓度也可能导致细胞死亡。在优化浓度时，建议采用不同浓度的过氧化氢进行预实验，选择能够诱导心肌细胞受损但不至于导致细胞死亡的最佳浓度。作用时间：通常在30分钟到24小

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问求助！！！！！如何用qPCR数据做信号通路筛选的分析？

精通小明术

使用qPCR数据进行信号通路筛选的分析，可以采用以下步骤：收集实验数据并处理数据：通过qPCR技术检测一组兴趣基因在不同条件下（例如，对照组和实验组）的表达水平。将数据导入到适当的统计软件中，例如R或Python，并进行标准化和规范化处理。确定差异表达基因：使用适当的统计方法（例如t-test或方差分析），确定哪些基因在对照组和实验组之间具有显著差异表达水平。这些差异表达基因可能是信号通路相关基因

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问兄弟们谁能告诉我t7rna聚合酶为啥老纯化出来没有活性呢，醉了，纯化工艺需要哪里注意

sswei

1、操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。2、不要太稀3、合适的pH，除非是进行聚焦层析，所使用的缓冲溶液pH避免与pI相同，防止蛋白质的沉淀。4、使用蛋白酶抑制剂，防止蛋白酶对目标蛋白的降解；在纯化细胞中的蛋白质时，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA对蛋白的污染。5、避免样品反复冻融和剧烈搅动，以防蛋白质的变性。6、缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环境。7、在缓冲溶液中加入0.1~1mmol/LDTT

3 回答808 围观

问CO-OP细胞裂解

z流沙z

有可能会降解一些，但如果全程都在冰上应该还好

4 回答491 围观

问有80kd的wb内参吗

z流沙z

没有额，常见的是actin43，GAPDH36，tubulin55，如果跟目的蛋白十分接近，可以先孵目的蛋白，然后采用一抗去除液，再孵内参

3 回答688 围观

问重组蛋白加入到细胞中

z流沙z

不建议，最好还是使用同一种属，免得被人质疑

3 回答378 围观

问pcr 扩增图谱很乱！！！

z流沙z

这个压根没有扩增出来。首先确定cDNA模板没有问题，然后先不稀释并增加上样量，先保证能扩增出来再根据ct值摸索最佳稀释比例。其次确定qpcr引物，在ncbi上面blast或者对照发表的文献，保证引物的特异性。最后qpcr试剂需要全程避光。

2 回答335 围观

问外毛根鞘细胞

sswei

可以用人黑素细胞基础培养基（不含钙）必须添加钙和人黑素细胞生长添加剂（HMGS）或不含 PMA 的人黑素细胞生长添加剂-2（HMGS-2）来培养。

3 回答398 围观

问CO-IP蛋白应该如何制备？

balalaLy

COip最后不要使用超声，延长裂解时间，我之前提蛋白都是常规冰上3小时，每半小时vortex

3 回答629 围观

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