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        求助原核表达蛋白诱导不出来

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        dxy_96emyjs

        原核表达中蛋白不表达可能是因为蛋白质N端含有甲硫氨酸,但是我们的序列不是大部分都以ATG(甲硫氨酸)开头的,那这是怎么回事呀

        还有如果序列中稀有密码子太多是不是也会导致诱导蛋白不表达呀

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        3 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        有些基因其本身含有许多稀有密码子,尤其是起始密码之后的15个碱基之内的稀有密码子,对蛋白表达有着很重要的影响。优化密码子对原核表达似乎效果很好,对真核表达系统未见得有很好的效果。对于真核表达,密码子优化只能起锦上添花的作用(确认有表达,以此来提高表达量),而不能雪中送炭(没有表达出来,通过密码子优化极有可能不奏效)。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        稀有密码子太多会导致表达下降的,所以实际操作不建议用太多稀有密码子

        user-title

        dxy_96emyjsuser-title

        那会不会导致表达不出来呀

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能导致蛋白质无法表达的原因可能是其他的问题,比如启动子或表达载体的问题、表达条件的问题、蛋白质的毒性等等。

        在原核表达中,稀有密码子过多也有可能会导致蛋白质表达不稳定或表达量较低。稀有密码子相对于常见密码子的供应量较少,因此在细胞翻译中,翻译速度可能会降低,蛋白质折叠可能会受到影响。因此,在原核表达中,尽可能使用常见密码子可以提高蛋白质的表达水平和稳定性。

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