实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问提前小鼠h22肝癌肿瘤浸润的淋巴细胞

土井挞克树

考虑还是消化和研磨的不充分，增加消化和研磨时间

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问小鼠原代心肌细胞提取

土井挞克树

新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩，细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力，你这是消化过度

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问Ensemble数据库转录本相关信息求助！

土井挞克树

不可以直接把人的看作小鼠，因为不是同一种属，需要在Ensemble数据库中添加小鼠的种属信息才可以

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问流式细胞仪测细胞凋亡求助

loveliufudan

实验组细胞碎片较多的原因可能与诱导细胞凋亡有关。凋亡是一种自身调控的程序性死亡方式，凋亡过程中细胞会发生细胞膜破裂、核染色质凝集和细胞碎片化等一系列特征性变化。因此，在细胞凋亡的过程中，细胞碎片增多是正常现象，但也需要注意是否存在过度凋亡或非程序性细胞死亡等异常情况。同时，实验中使用的药物或其他因素也可能会影响细胞的形态和特征，需要结合实验设计和其他指标综合考虑。建议您对实验组和对照组的样本进行进

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问用TSA培养基和MH培养基做药敏实验得到的结果不同该用哪个培养基的结果呢

loveliufudan

TSA培养基和MH培养基都是常用的通用培养基，但它们的配方和性质略有不同。TSA培养基主要是以肉汤和胰蛋白胨为基础，适合于多种细菌的培养，而MH培养基则是以马铃薯提取物、蛋白胨和酵母提取物为基础，更适合于培养革兰氏阳性菌和厌氧菌。因此，在进行药敏实验时，如果样品中包含革兰氏阳性菌或厌氧菌，则可以优先选择使用MH培养基进行实验。如果样品中只包含革兰氏阴性菌或其他常见菌种，则可以使用TSA培养基进行实

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问有人做过给大鼠静脉注射凝血酶吗，求药物剂量、频次及相关经验分享

sswei

凝血酶剂量为10 U/kg，凝血酶浓度为2 U/mL。

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问原代细胞多次传代后碱性磷酸酶怎么变化啊

loveliufudan

一般情况下，原代细胞经过多次传代后，其碱性磷酸酶（alkaline phosphatase）活性会逐渐降低。这是因为细胞在不断分裂和增殖的过程中，会逐渐失去其原始状态，包括其特定的表型和功能。此外，不同类型的细胞在多次传代后对碱性磷酸酶的变化也可能不同。有些细胞类型在多次传代后仍然保持较高的碱性磷酸酶活性，而其他细胞类型可能会完全失去这种酶活性。需要注意的是，细胞的传代次数和其碱性磷酸酶活性之间并

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问如何p一个1980bp长度的cDNA片段

z流沙z

2000bp左右还行，而且引物特异性高，如果有一些非特异性的只需要升高一点温度即可，其他基本不用调整。p不出来最大的问题应该是这个目的基因的表达量太低，可以在ncbi上面查看这个基因在哪个组织的表达量比较高，采用相应的模板。

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问为什么293T细胞一传代就死了？

z流沙z

293t生长比较快，传代比例应该不止1：2，另外要注意不要吹打太多

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问请问stdev范围多少正常，误差棒太短看不见的图片能用来发sci吗？

loveliufudan

对于数据的标准差，其正常范围取决于实验设计和具体研究领域。在一些实验中，标准差可以很小，例如在高度控制的实验中，标准差可能只有几个百分点。而在其他类型的实验中，标准差可能会很大，甚至可以超过均值的一半以上。在科学研究中，误差棒（error bars）是用于表示数据集合的变化范围和不确定性的重要工具。误差棒的长度取决于标准差的大小，标准差越大，误差棒就越长。如果误差棒太短，可能会掩盖数据变化的重要信

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问Thp1细胞培养的要点

sswei

THP-1细胞培养于含有10%FBS+1%P/S的RPMI-1640培养基中，培养环境为37℃，5%CO2。可以每隔3-4天加一些新鲜的培养基，或直接传代。细胞传代：当细胞密度达到约8x10^5cells/ml左右时，即可进行传代。由于是悬浮细胞，可直接将细胞吸出，离心之后传代。传代最少浓度不应少于1x10^5 cells/ml。注意事项细胞养不好，可能的原因有，THP-1细胞特别依赖细胞浓度，A

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问把CAMV35S启动子连在LUC载体前应该怎么做

z流沙z

首先应该设计引物（带有酶切位点和保护碱基等），pcr出来酶切连接载体

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问请问目的蛋白诱导成功了吗 12是对照组，3-6是实验组

loveliufudan

看图片感觉诱导没成功，您可以考虑以下几个方面进行排查和改进：1.优化转染条件：如果您是通过转染方法进行蛋白表达，您可以尝试优化转染条件，例如优化转染剂的用量、时间、温度等条件。2.更换细胞系：有些细胞系不适合表达特定的蛋白，您可以尝试更换其他细胞系，例如选择能够表达目的蛋白的细胞系。3.优化培养条件：您可以尝试优化培养条件，例如改变培养基组成、添加细胞因子或小分子化合物等，以提高目的蛋白的表达水平

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问求助原核表达蛋白诱导不出来

loveliufudan

可能导致蛋白质无法表达的原因可能是其他的问题，比如启动子或表达载体的问题、表达条件的问题、蛋白质的毒性等等。在原核表达中，稀有密码子过多也有可能会导致蛋白质表达不稳定或表达量较低。稀有密码子相对于常见密码子的供应量较少，因此在细胞翻译中，翻译速度可能会降低，蛋白质折叠可能会受到影响。因此，在原核表达中，尽可能使用常见密码子可以提高蛋白质的表达水平和稳定性。

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问为什么慢病毒保存在-80℃无反复冻融，滴度持续显著下降？

假象KFFL

可能是冻存温度太低导致滴度持续显著下降，还有会不会是冻存病毒的液体出现问题。

3 回答1091 围观

问大肠杆菌分光过度用多少nm

dxy_mqg1dtg8

大肠杆菌分光光度检测常用的波长是600nm。在分光光度计上设置波长为600nm时，可以测量到大肠杆菌悬浮液的吸光度。分光光度检测大肠杆菌的吸光度可以用于判断其细胞浓度。一般来说，大肠杆菌的吸光度和细胞数呈线性关系，但是需要注意到，当吸光度达到较高值时，可能会出现分光光度计的分光过度现象，此时需要选择合适的稀释倍数以避免分光过度对测量结果的影响。

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问WB样品没有条带？是怎么回事？

dxy_mqg1dtg8

出现WB样品没有条带的情况可能有以下几种可能的原因：蛋白质含量过低：WB的检测需要一定的蛋白质含量才能够进行，如果样品含量太低，则可能无法检测到条带。在样品制备时，可能需要增加样品量或调整蛋白提取条件，以获得足够的蛋白质含量。蛋白质迁移问题：WB的条带生成需要经过蛋白质电泳和膜上转移两个步骤，如果蛋白质没有完全迁移到膜上，则可能会导致条带不清晰或者没有条带。在蛋白质电泳过程中，需要确保电泳条件的稳

8 回答4495 围观

问PBS出现沉淀，还能用吗？

dxy_mqg1dtg8

如果PBS出现沉淀，可以尝试通过轻轻摇晃或逆流混匀来重新悬浮沉淀，如果能够悬浮则可以继续使用。如果PBS沉淀过多或者无法悬浮，则需要重新制备新的PBS缓冲液。

8 回答6082 围观

问GEO数据标准化及消除批次

loveliufudan

应该是成功的，观察样本之间的聚类情况，若同组实验样本之间聚集在一起，且不同组实验样本之间有明显的分离趋势，则说明标准化和批次效应消除可能成功。

2 回答565 围观

问生物膜结晶紫染色

dxy_58wfiw47

我之前也遇到这样的问题后来发现清洗完浮游菌后直接放烘箱烘干（15-20分钟即可）效果比用甲醇等固定液效果要好可以试试看你的菌适不适合这个方法

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