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        MHCC-97h细胞越养,就越小,都缩起来了;还有HLE细胞养起来有什么技巧,经常吹不散

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        dxy_ey8j0mor


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        3 个回答

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        养HLE细胞技巧与方法:

        传代密度 :细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养

        传代比例 :首次传代建议1:2传代

        传代方法:

        1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

        2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

        3.按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。

        4.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        MHCC-97h细胞皱缩考虑是存在脱水,需要控制培养基的渗透压与细胞内一致,避免脱水

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        对于MHCC-97h细胞越养越小的情况,有可能是由于过度培养导致细胞进入凋亡状态,也可能是培养条件不适合细胞生长导致的。您可以尝试以下方法来改善细胞状态:

        检查培养条件是否适合:包括温度、湿度、CO2浓度、培养液配方、培养瓶种类等,尽量让细胞在最适宜的条件下生长。

        严格控制细胞密度:细胞密度太高容易导致营养物质和氧气供应不足,细胞过度接触也会导致细胞凋亡,建议将细胞密度控制在合适的范围内。

        注意培养时间:过度培养也是导致细胞凋亡的主要原因之一,建议按照实验需要培养一定的时间就及时处理细胞。

        对于HLE细胞的问题,吹不散可能是由于细胞聚集过多导致的,您可以尝试以下方法:

        增加细胞洗涤次数:细胞洗涤可以去除培养液中的蛋白质、细胞碎片等,减少细胞聚集。

        适当增加胰酶消化的时间:胰酶可以将细胞分散,如果吹不散可以考虑增加胰酶消化的时间。

        调整培养条件:包括培养基配方、CO2浓度、温度等,适当调整可以改善细胞状态。


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