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        原代细胞首次传代问题

        相关实验:🔥 原代细胞培养实验

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        烟火太完美

        通过消化法分离的原代细胞大概8天长满,25cm2培养瓶,但首次传代时使用0.25%胰酶EDTA在37度消化时细胞不脱落,消化时间长(前后更换3次胰酶大概15-20分钟),导致传代后细胞不贴壁。在不考虑更换胰酶的情况下,各位老师有没有什么改进的方法?

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        3 个回答

        user-title

        Luckybabygirl

        有帮助

        看来这个细胞也是很娇贵的,在胰酶消化的过程中,你可以试试轻微吹打,不能单凭它自己消化,那样消化时间过长,对细胞是有损伤的。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        不更换胰酶的话可以考虑延长消化时间

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        以下是一些可能有助于改进的方法:

        调整胰酶浓度和消化时间:可以尝试使用不同浓度的胰酶和不同时间的消化来寻找最适合的条件。通常情况下,0.05%-0.25%的胰酶浓度和5-10分钟的消化时间是较为常见的条件。

        使用胰蛋白酶替代胰酶:在传代时,胰蛋白酶有时比胰酶更容易消化细胞。可以尝试使用不同浓度的胰蛋白酶来寻找最适合的条件。

        添加细胞生长因子:在传代过程中添加适当的细胞生长因子(如EGF、FGF等)可以促进细胞生长和附着,并加快细胞增殖速度。

        细胞质膜保护剂:在胰酶消化过程中加入一些细胞质膜保护剂(如BSA、HSA等)可以降低细胞膜受损程度,促进细胞脱落。

        更换培养基:在传代之前,可以将培养基更换为新鲜的培养基,以提高细胞的健康状况和附着能力。

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