实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问分离单个核细胞有比较好的Ficoll试剂吗？看的大多数都是淋巴细胞分离液,没有PBMC分离液，求助谢

Dr_劉医生

Ficoll本身就可以用来分离PBMC，Ficoll 密度梯度离心法可以用于分离外周血单个核细胞。该方法的原理是：单个核细胞的体积、形状和比重与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞比重较大，为 1.092 左右，而淋巴细胞和单个核细胞比重为 1.075 左右。具体可以看丁香通里的这篇文章https://www.biomart.cn/experiment/430/488/715/2715661.htm

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问配制的VRBA培养基颜色偏红是为什么？

Dr_劉医生

可以减少中性红的量，中性红作为pH指示剂，用于显示pH值。

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问用来做流式的的组织消化液怎么配置呀

Dr_劉医生

流式细胞术中的组织消化液配制方法因实验目的和样本来源不同而异。以下是一种常用的配制方法：配制0.3%胶原酶Ⅳ母液，0.22um滤膜过滤后保存于4℃备用。KCl、Glucose、EDTA溶液按照一定比例溶于无菌的PBS中，调节PH到7.4。将0.3%胶原酶Ⅳ母液按照一定比例加入到②中配制好的溶液中，37℃预热备用。

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问脑缺血再灌注的大脑中动脉阻塞阻塞模型做透射电镜切片取哪个部位最佳呢

Dr_劉医生

一般选择大脑皮质作为切片的部位。

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问病毒载量、病毒滴度和病毒RNA拷贝数有什么区别和联系？

loveliufudan

病毒载量、病毒滴度和病毒RNA拷贝数是描述病毒数量和活性的不同指标。病毒载量指的是病毒在某种样本中的总量，通常以基因组或者抗原的数量为单位来表示。在分析病毒感染程度或者病毒颗粒的分布时，病毒载量是一个比较常用的指标。病毒滴度指的是病毒的活性，也就是病毒在一定条件下可以产生多少感染力的单位。常用的病毒滴度单位包括TCID50（50%组织培养传染剂量）、PFU（含有感染单元的单位）等。病毒RNA拷贝数

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问请问在磁性活化细胞分选（MACS）试验中，剩余的未与细胞结合的磁珠如何与磁细胞分离开来？

Dr_劉医生

在MACS分选中，未与细胞结合的磁珠可以通过磁场分离。MACS分选是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在分选柱内，而无该种表面抗原的细胞由于不能与连接有磁珠的特异性单抗相结合而没有磁性，不在分选柱内停留，进而使细胞得以分离。因此，未与细胞结合的磁珠可以通过磁场分离。

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问高效液相色谱待测样品浓度确定

Dr_劉医生

在高效液相色谱中，可以通过内标法来确定待测样品和对照品的浓度是否适合检测。内标是已知浓度的化合物，它与待测样品一起进入色谱柱进行分离。在分离后，可以通过内标的峰面积与待测样品的峰面积之比来计算待测样品的浓度。另外，对照品浓度与峰面积之比等于样品中浓度与峰面积之比，由此可以计算出样品的浓度。

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问YOCK抑制剂Y27632

loveliufudan

虽然RhoA是ROCK的上游调节因子，但是Y27632也被发现具有一定的抑制RhoA表达的作用，具体原因可能包括以下几点：Y27632对RhoA的转录和翻译过程具有一定的抑制作用，从而减少了RhoA的表达水平。Y27632还能够通过抑制细胞骨架蛋白的重组，降低RhoA的活性，从而降低RhoA信号通路的效应。此外，Y27632还能够影响一系列细胞信号通路的活性，包括PI3K/Akt、MAPK等，从而

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问MEGA序列对比之后，如何确定合适的保守区域设计简并引物？

Dr_劉医生

您可以利用NCBI的Entrez检索系统，查找到一条相关序列，随后利用这一序列使用BLASTP（通过蛋白查蛋白），在整个NR数据库中查找与之相似的氨基酸序列。对所有的序列进行多序列比对，将搜索到的同一基因的不同氨基酸序列进行多序列比对，所有序列的共有部分将会显示出来。

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问粪便中虫卵的收集最好的方法是什么

Dr_劉医生

粪便中虫卵的收集方法有很多种，其中一种方法是将5～10g粪便置于100ml烧杯中，加入少量饱和盐水搅拌混匀后，继续加入10～20倍的饱和盐水，用玻棒搅匀，通过250μm（60目）细网筛或两层纱布过滤，将滤液置平底试管内，静置30min左右，则虫卵上浮；用直径0.5～1.0cm的金属圈平着接触滤液表面，提起后将粘于金属圈上的液膜抖落于载玻片上，如此多次蘸取不同部位的液面后，加盖玻片镜检。另外还有其他

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问时空组学与蛋白组学有什么区别

Dr_劉医生

时空组学和蛋白组学是两个不同的概念。蛋白质组学（Proteomics）是研究一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质的统称，它是基因最终真实表达的反应，因此将其作为研究对象是非常重要的。时空组学则是一个大楼的所有位置的，所有时间段的，详细施工方案。

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问混合背景条件性敲除鼠的研究

Dr_劉医生

C57BL/6和ICR小鼠的杂交繁殖可以获得混合背景的小鼠。但是前提是，实验进行前，条件性敲除小鼠的繁殖需要进行基因型鉴定。

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问compound discoverer的biocyc账号验证失败

Dr_劉医生

校园网没有购买批量授权就用不了，只能自己花钱，或者去买一个二手的账号

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问TEM图里白色的是什么？请高手指点！

努力邱邱

多肽请用醋酸双氧铀染色，白色是因为染液PH不对造成的，做新鲜染液再试试。

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问丙泊酚标准溶液浓度如何配置

Dr_劉医生

其实是一个量，丙泊酚标准溶液的浓度可以根据需要进行配置。一般来说，丙泊酚标准溶液的浓度为1mg/mL。

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问果蝇唾腺染色体的观察实验实验室失败的原因有哪些？

Dr_劉医生

果蝇唾液腺染色体的观察实验失败的原因可能有很多种，其中包括样品制备不当、染色不充分、显微镜调焦不准确等。

3 回答1879 围观

问生物膜结晶紫染色清洗问题

Topmicro

固定好之后不要正对着生物膜部分冲一般都没问题

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问药物包封检测，紫外特征光谱两个药撞了，不用HPLC，也没有荧光激发特征，请问还能用什么方法测定各自的

土井挞克树

可以做紫外-可见光谱鉴别联合红外光谱鉴别来检测两种药物的含量

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问RNA探针凝胶电泳相关问题

Dr_劉医生

从图中可看到您的结果基本没有橙红色，而RNA探针电泳实验中，如果RNA探针未出现明显橙红色，可能是因为探针的浓度过低或者探针的标记效率不高。

3 回答450 围观

问提核苷酸苯酚氯仿萃取

Dr_劉医生

固体苯酚的氯仿萃取方法有很多种，其中一种方法是：将固体苯酚和氯仿按1：1的体积比混合，加入待提取物质，振荡混合，离心分层，取上层液，加入等体积异丙醇，振荡混合，离心分层，取上层液。

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