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        试剂盒提取细菌基因组,细菌离心离不下去

        相关实验:DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验

        user-title

        3啦啦啦

        用天根试剂盒(离心柱法)提取细菌基因组DNA。

        但是遇到粘液性很强的革兰阴性菌,离心离不下去怎么办?

        试过用PBS洗涤细菌再进行后续提取操作,但是浓度一直达不到测序公司要求的200ng/ul。请问大家有什么建议吗?

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        4 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        先用pbs冲洗,把大块分开后,加入胶原酶分解,然后离心先把革兰氏阴性菌离心出去,再进行提取

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        摇菌的时间和体积多一点,这样提出来就高了

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        对于粘液性较强的细菌,常规的离心柱法可能无法有效地去除粘液和其他细胞碎片等杂质,导致提取的DNA浓度较低。以下是一些可能的解决方案:

        使用其他提取方法:如果离心柱法无法去除粘液和杂质,可以尝试其他的基因组DNA提取方法。比如,可以尝试利用热裂解或者化学裂解的方法来提取DNA,这些方法可能会比离心柱法更适合粘液性较强的细菌。

        改变细胞破碎条件:可以尝试使用更加强力的破碎条件,如较高浓度的蛋白酶K或利用超声波破碎器等。

        对细菌进行多次洗涤:可以尝试使用PBS或其他缓冲液多次洗涤细菌,以去除粘液和其他杂质。洗涤的过程中可以适当加入机械搅拌等操作,以帮助去除杂质。

        尝试使用其他类型的离心柱:如果使用的离心柱无法离心下来粘液,可以尝试使用其他类型的离心柱,如CTAB离心柱等。

        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助

        除外用PBS冲洗后,还可以加入蛋白酶K或者SDS来离心。

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