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        定量PCR没有数据,曲线也是乱糟糟,救命啊!!

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

        user-title

        dxy_lywi9f05

        请问有大神知道怎么解决么?定量PCR曲线一团糟,也没有ct值,引物重新设计了也还是不行。

        救命啊!!!


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        6 个回答

        user-title

        来一起探讨

        有帮助

        可以看看你的反应体系。或者是使用设计的扩增条件。或是看一下所选的荧光通道与试剂是否匹配。

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        根据图中部分ct值可见模板含量太低了,有可能是目的基因表达水平低,也有可能是逆转录效率不够高。建议重新提取RNA,然后最大量进行逆转录,增加cDNA模板量

        user-title

        是TTT

        有帮助

        这没有扩增,排除引物的问题的话,你提的RNA有没有问题呢,建议可以用逆转录的样品跑一下DNA凝胶看看有没有条带

        user-title

        相似又互补

        有帮助

        找别人确定能跑出来的内参试一下,如果能跑出来,就说明是你引物的问题,如果也跑不出来,可能就是你的样本降解了,或者操作过程不是无菌,再或者程序不对

        user-title

        沫子大大

        有帮助

        首先是根据文献或者网站查阅正确的引物,其次你提rna的时候是不是被污染,降解。这些都有可能的。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        扩增效率低,反应条件不够优化。设计更好的引物或探针;改用三步法进行反应;适当降低退火温度;增加镁离子浓度等。

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