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实验问答

23,133,855 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问克隆基因时，测序结果比对氨基酸序列，发现总是在同一位置发生氨基酸突变，这是什么原因呢

土井挞克树

与局部的碱基有关系，一般GC碱基发生突变的可能性比较大所以容易在此突变

1 回答690 围观

问江湖救急！谁能写一下，超详细的DF-1细胞培养过程啊？？

loveliufudan

1.准备工具和试剂DF-1细胞贴壁细胞培养瓶完全培养基：DMEM（高糖）培养基，含10%胎牛血清（FBS），1%青霉素-链霉素溶液DPBS（不含钙、镁）细胞刮刀离心机和离心管显微镜无菌操作台2.培养前的准备将培养瓶和培养基从冰箱和冰柜中取出，分别放入37℃恒温箱中和室温下复温。配制好的完全培养基在37℃恒温箱中加热30-60分钟，使培养基达到37℃。3.细胞传代将离壁的细胞吸入离心管中，然后离心5

2 回答1566 围观

问3T3-l1做诱导分化，到后面细胞飘得就越来越多，试了换小枪头轻柔的加，还是会飘得比较多，请问各位还有没有其他什么办法可以让细胞那么厉害

loveliufudan

以下是一些建议，可以尽量减少细胞飘动问题：细胞密度：确保在开始诱导分化之前，细胞密度达到适当的水平。一般来说，3T3-L1细胞在形成完整的单层且过密度的情况下（称为“过度传代”）才能有效地分化为脂肪细胞。当细胞密度过低时，细胞间的相互作用会减弱，导致细胞更容易脱落。诱导分化时培养液的更换：在分化过程中，尽量减少或避免不必要的培养液更换。在更换培养液时，轻柔地沿着培养瓶壁斜向加液，避免直接将培养液吹

2 回答425 围观

问HE高清染色，伊红不着色，染色液刚换的，这是什么原因怎么解决

loveliufudan

可能是有以下原因：伊红染色液过度稀释：伊红染色液如果过度稀释，也会导致染色效果不佳。样本处理不当：如果样本在制备过程中没有经过充分的固定和脱水，或者在染色前未经过充分的去蜡处理，也会影响伊红的染色效果。

3 回答1117 围观

问怎么去做细菌吸光度-浓度试验？

loveliufudan

可能是由于初始菌悬液浓度较高，即使经过多次稀释，菌落数仍然过多。为了在实验中获得合适的菌落数，可以尝试以下步骤：首先准备适当浓度的菌悬液，使其吸光度（通常在600 nm处测量）约为0.1。这可以通过进一步稀释初始菌悬液来实现。例如，可以尝试将初始菌悬液与无菌生理盐水按1:9的比例混合，然后再测量吸光度。根据需要进行适当调整。当吸光度调整到合适的范围后，继续进行逐级稀释。例如，可以尝试进行10^4、

2 回答1830 围观

问AKTA纯化蛋白所用的缓冲液A、B液和脱盐液请问配方是什么

loveliufudan

缓冲液A和缓冲液B的具体配方以及脱盐液的配方取决于你的纯化策略和目标蛋白质的特性。以下是一些常见的配方：1.离子交换层析：缓冲液A（低离子强度缓冲液）：20 mM Tris-HCl，pH 8.0缓冲液B（高离子强度缓冲液）：20 mM Tris-HCl，pH 8.01 M NaCl脱盐液（用于对蛋白进行脱盐）：20 mM Tris-HCl，pH 8.02.亲和层析（如Ni-NTA层析）：缓冲液A（

2 回答1980 围观

问染色体制片效果和实验室温湿度等环境因素的关系？

loveliufudan

环境因素确实可能影响到细胞制片过程中的质量。温度、湿度和环境稳定性在染色体制片过程中起着重要作用。以下是一些建议，以帮助您改善制片质量和避免外界因素的影响：控制实验室环境：在进行染色体制片实验时，尽量保持实验室温度和湿度相对稳定。如果可能，为实验室安装空调和加湿器以保持恒定的温度和湿度。在恶劣天气条件下（如高湿度），尽量避免进行实验。标准化固定液浓度：在制片过程中，确保使用适当浓度的固定液。过高或

2 回答1536 围观

问外周血样本进行单细胞测序，如何保持样本活性最大，取样过程应注意什么？

loveliufudan

进行单细胞测序需要采集外周血细胞样本，并且在样本采集和处理过程中，保持细胞活性和完整性是非常重要的。以下是一些关于如何保持样本活性最大和取样过程应注意的建议：1.采集新鲜样本：尽可能采集新鲜的血液样本，避免长时间存放或运输，这会降低细胞的活性和完整性。2.使用无菌技术：在取样和处理样本的过程中，应该使用无菌技术，避免任何细菌或病毒污染样本。3.使用合适的抗凝剂：血液样本在采集后需要立即加入合适的抗

3 回答1041 围观

问为什么在做酶联免疫吸附检测TNF－α酶标仪上的数据超过检测上限？除了浓度过高还有别的原因吗？

loveliufudan

除了样品中TNF-α浓度过高之外，导致酶联免疫吸附检测数据超过检测上限的可能原因还有以下几个：抗原表达量过高：如果你的样品中含有大量表达TNF-α的细胞或组织，可能会导致检测结果超过检测上限。检测方法不够灵敏：如果你使用的检测方法灵敏度不够高，也可能导致数据超过检测上限。操作错误：在进行酶联免疫吸附检测时，如果出现了操作错误，比如反应时间过长或者使用了过多的检测物，也可能导致数据超过检测上限。如果

2 回答694 围观

问微流控制备双层液滴有什么要点吗？

loveliufudan

以下是一些建议和注意事项，供您参考：1.毛细管的尖端距离：尖端距离需要适中，以保持液滴的稳定性并防止两个液滴之间的过早融合。通常，根据实验液相的流速和流动性，尖端距离可以在0.5至3 mm之间进行调整。建议先使用较大的距离开始尝试，并在实验中逐步调整以获得最佳结果。2.调整流速：在进行液滴制备时，内外相和中间相的流速会影响液滴的形成。请确保内相和外相的流速适中，以使液滴能够在毛细管尖端正常形成。您

2 回答441 围观

问pcr的平台期为什么越跑越低？

loveliufudan

PCR反应的平台期的高低受到许多因素的影响，包括PCR反应体系中的成分、放大区域、反应条件等等。在同一个样品内，重复跑PCR会有平台期高低不一的情况，这可能是由于样品的质量和含量的差异，反应条件的变化，PCR反应体系的变化等因素导致的。此外，error bar的大小也受到许多因素的影响，例如PCR反应的可重复性、PCR引物的设计、模板DNA的质量等等。因此，要使error bar变小，需要优化PC

2 回答1474 围观

问转录表达水平FPKM值在多少以内默认基因是沉默不表达的？有没有文献参考？

土井挞克树

通常模块中的基因FPKM＜1，是默认不表达的。

2 回答2910 围观

问Acta Pharmaceutica Sinica B的with editor多久呢多长时间会under review诶

loveliufudan

通常来说，初次审稿时间约为4-6周，修稿后的审稿时间通常为2-4周。但是，具体的时间可能因各种因素而有所不同，因此建议您耐心等待

2 回答744 围观

问对动物进行病毒感染实验，可以通过哪些指标来判断动物对病毒的易感性？

蓝莓小布丁

动物受到病毒感染的时候，因为病毒种类的不一样，血常规的指标也会有所不同。但一般来说常见的白细胞，淋巴细胞，中性粒细胞，单核细胞，血小板等指标检测综合起来可以判断病毒易感情况。

1 回答419 围观

问小鼠原代神经元活细胞成像观察如何驱动自噬体运动？

loveliufudan

以下是一些建议：饥饿处理：饥饿是一种广泛应用的自噬诱导方法。但是，您需要确定饥饿处理的时间和条件。通常来说，饥饿处理的时间在数小时到数十小时之间，取决于处理的类型和实验的目的。EBSS是一种无营养的缓冲液，可以诱导自噬。在EBSS中处理的时间一般为2-6小时，但也可以更长时间处理。另外，您需要控制EBSS的pH，将其维持在7.4左右。药物处理：常用的自噬诱导剂有Rapamycin、Chloroqu

2 回答380 围观

问水凝胶用于细胞培养时一定要冻干吗？

土井挞克树

固化的水凝胶也可以用于细胞培养。

3 回答1349 围观

问细胞转染试剂PEI相关问题求助？

lyang556

这个是可以的，保存两三个月还是能用的。

3 回答2005 围观

问高效液相进样要过夜的话最后怎么设置流动相冲洗柱子啊，怎么封柱子啊？

sswei

需过夜保存，可将流速保持在 0.1 到 0.2 mL/min。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。

3 回答1266 围观

问戊巴比妥钠和水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠之后的肝毒性

丁香园张医生

10%的水合氯醛对大鼠麻醉效果比较好，包括戊巴比妥钠，大鼠用2%的戊巴比妥钠，麻醉完的阴性对照肝毒性一般都是正常的。

3 回答1017 围观

问wb条带目的蛋白下面一片黑

求求不要翻车啦

可能是封闭时间比较短，洗膜没洗干净，一抗浓度适当降低，等等

4 回答1545 围观

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