实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问克隆基因时，测序结果比对氨基酸序列，发现总是在同一位置发生氨基酸突变，这是什么原因呢

土井挞克树

与局部的碱基有关系，一般GC碱基发生突变的可能性比较大所以容易在此突变

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问江湖救急！谁能写一下，超详细的DF-1细胞培养过程啊？？

loveliufudan

1.准备工具和试剂DF-1细胞贴壁细胞培养瓶完全培养基：DMEM（高糖）培养基，含10%胎牛血清（FBS），1%青霉素-链霉素溶液DPBS（不含钙、镁）细胞刮刀离心机和离心管显微镜无菌操作台2.培养前的准备将培养瓶和培养基从冰箱和冰柜中取出，分别放入37℃恒温箱中和室温下复温。配制好的完全培养基在37℃恒温箱中加热30-60分钟，使培养基达到37℃。3.细胞传代将离壁的细胞吸入离心管中，然后离心5

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问3T3-l1做诱导分化，到后面细胞飘得就越来越多，试了换小枪头轻柔的加，还是会飘得比较多，请问各位还有没有其他什么办法可以让细胞那么厉害

loveliufudan

以下是一些建议，可以尽量减少细胞飘动问题：细胞密度：确保在开始诱导分化之前，细胞密度达到适当的水平。一般来说，3T3-L1细胞在形成完整的单层且过密度的情况下（称为“过度传代”）才能有效地分化为脂肪细胞。当细胞密度过低时，细胞间的相互作用会减弱，导致细胞更容易脱落。诱导分化时培养液的更换：在分化过程中，尽量减少或避免不必要的培养液更换。在更换培养液时，轻柔地沿着培养瓶壁斜向加液，避免直接将培养液吹

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问有没有什么办法让ELISA标准曲线的截距值不那么高…

loveliufudan

以下是一些可能的解决办法：改变标准品的浓度。可以尝试增加或减少标准品的浓度，以使曲线的截距值适当。如果标准品的浓度过低，则可以增加标准品的浓度，如果标准品的浓度过高，则可以将其稀释。更换检测试剂盒。如果检测灵敏度过低，可以尝试更换其他品牌的试剂盒，以获得更好的灵敏度。调整检测条件。可以尝试调整ELISA的检测条件，例如改变底物浓度、反应时间等参数，以获得更好的灵敏度和准确性。改变分析方法。如果EL

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问 Calhm2的拮抗剂是什么？怎么把Calhm2和1分开，只拮抗其中的一种？

土井挞克树

EFhd2可以特异性下调Calhm2

1 回答282 围观

问为什么在做酶联免疫吸附检测TNF－α酶标仪上的数据超过检测上限？除了浓度过高还有别的原因吗？

loveliufudan

除了样品中TNF-α浓度过高之外，导致酶联免疫吸附检测数据超过检测上限的可能原因还有以下几个：抗原表达量过高：如果你的样品中含有大量表达TNF-α的细胞或组织，可能会导致检测结果超过检测上限。检测方法不够灵敏：如果你使用的检测方法灵敏度不够高，也可能导致数据超过检测上限。操作错误：在进行酶联免疫吸附检测时，如果出现了操作错误，比如反应时间过长或者使用了过多的检测物，也可能导致数据超过检测上限。如果

2 回答671 围观

问pcr的平台期为什么越跑越低？

loveliufudan

PCR反应的平台期的高低受到许多因素的影响，包括PCR反应体系中的成分、放大区域、反应条件等等。在同一个样品内，重复跑PCR会有平台期高低不一的情况，这可能是由于样品的质量和含量的差异，反应条件的变化，PCR反应体系的变化等因素导致的。此外，error bar的大小也受到许多因素的影响，例如PCR反应的可重复性、PCR引物的设计、模板DNA的质量等等。因此，要使error bar变小，需要优化PC

2 回答1450 围观

问转录表达水平FPKM值在多少以内默认基因是沉默不表达的？有没有文献参考？

土井挞克树

通常模块中的基因FPKM＜1，是默认不表达的。

2 回答2868 围观

问想获得天然活性药物近十年产量的报告图片，应该从哪里找啊

土井挞克树

CSDN社区可以搜到天然活性药物产量报告

1 回答227 围观

问Acta Pharmaceutica Sinica B的with editor多久呢多长时间会under review诶

loveliufudan

通常来说，初次审稿时间约为4-6周，修稿后的审稿时间通常为2-4周。但是，具体的时间可能因各种因素而有所不同，因此建议您耐心等待

2 回答713 围观

问小鼠原代神经元活细胞成像观察如何驱动自噬体运动？

loveliufudan

以下是一些建议：饥饿处理：饥饿是一种广泛应用的自噬诱导方法。但是，您需要确定饥饿处理的时间和条件。通常来说，饥饿处理的时间在数小时到数十小时之间，取决于处理的类型和实验的目的。EBSS是一种无营养的缓冲液，可以诱导自噬。在EBSS中处理的时间一般为2-6小时，但也可以更长时间处理。另外，您需要控制EBSS的pH，将其维持在7.4左右。药物处理：常用的自噬诱导剂有Rapamycin、Chloroqu

2 回答370 围观

问水凝胶用于细胞培养时一定要冻干吗？

土井挞克树

固化的水凝胶也可以用于细胞培养。

3 回答1335 围观

问细胞转染试剂PEI相关问题求助？

lyang556

这个是可以的，保存两三个月还是能用的。

3 回答1966 围观

问有没有大佬能教一下影像组学怎么入门？

sswei

影像组学的研究对象是影像，它的研究方法则是将影像内包含的所有信息提取出来然后进行综合系统化分析。更确切的说，影像组学是采用自动化算法从影像的感兴趣区（ROI，region ofinterest）内提取出大量的特征信息作为研究对象，并进一步采用多样化的统计分析和数据挖掘方法从大批量信息中提取和剥离出真正起作用的关键信息，最终用于疾病的辅助诊断、分类或分级。工作流程包括以下阶段：(1) Imag

3 回答362 围观

问高效液相进样要过夜的话最后怎么设置流动相冲洗柱子啊，怎么封柱子啊？

sswei

需过夜保存，可将流速保持在 0.1 到 0.2 mL/min。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。

3 回答1215 围观

问目前在做基因克隆，P不出来条带的原因有什么呢？有时候会出现非特异性扩增，但是不能重复？

sswei

引物可能有问题，另外，可能PCR的条件不对，退火的温度太低了导致非特异性扩增。

5 回答2434 围观

问引物设计的过长会有什么弊端？

sswei

引物过长会增加成本和引物的Tm 值,会影响PCR的特异性，引物越长,能够配对的概率减少,所以特异性增加或引物越长,包含的碱基越多,发生错配的概率就越高。

5 回答11415 围观

问想收集内皮祖细胞条件培养基用于培养内皮细胞

sswei

内皮细胞培养的时候对培养基的要求很高，必须要使用MCDB这种不是很常规的基础培养基，然后加血清，加EGF,加胰岛素才能好好生长。

3 回答305 围观

问戊巴比妥钠和水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠之后的肝毒性

丁香园张医生

10%的水合氯醛对大鼠麻醉效果比较好，包括戊巴比妥钠，大鼠用2%的戊巴比妥钠，麻醉完的阴性对照肝毒性一般都是正常的。

3 回答992 围观

问wb条带目的蛋白下面一片黑

求求不要翻车啦

可能是封闭时间比较短，洗膜没洗干净，一抗浓度适当降低，等等

4 回答1507 围观

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