实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问cutoff值是否与限制性立方样条中HR＝1的点等同?

土井挞克树

不是同一个，cutoff更倾向于比较特异性和敏感度。

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问Gpower样本量计算求助

土井挞克树

Gpower样本量计算步骤如下：1、选择统计方法：（Exact—Fisher\F test—方差分析\t test差异性t检验\X2test—卡方检验\Z test—非参数检验）2.进一步选择分类：（这里以t 检验为例）3、确定想得到的参数：①A Priori：研究设计时，想知道所需样本量N②Compromise：α与β固定（不常用）③Criterion：计算α（一般α为0.01、0.05不需要计

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问亚组分析找不到异质性来源

土井挞克树

建议用年龄作为分组，只要异质性差异不大就可以做，其他的分组都不太合适

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问有没有战友做无细胞蛋白表达系统啊

loveliufudan

首先，确保您的质粒构建是正确的，包括检查您的DNA序列和构建方法是否正确。此外，您需要选择适合您的蛋白质的无细胞表达系统和载体，不同的蛋白质可能需要不同的系统和载体。其次，确保您的转化和诱导条件是正确的。对于BL21 (DE3)菌株，常用的是IPTG诱导，但是有时过高或过低的IPTG浓度都会影响蛋白质表达。此外，您需要在合适的时间点收获细胞，不同的蛋白质可能需要不同的时间点。最后，确保您的提取条件

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问TB培养基提质粒浓度低

loveliufudan

TB培养基相对于LB培养基更适合高密度细胞培养和蛋白表达，但这并不一定意味着TB培养基就能获得更高的质粒浓度。下面是可能影响质粒浓度的几个因素：细胞密度：对于大多数质粒表达系统，细胞密度对于质粒表达和质粒浓度都是有影响的。如果您在LB和TB培养基中使用不同的细胞密度，这可能会导致两者之间的质粒浓度差异。培养时间：质粒表达通常需要足够的培养时间。如果您在LB和TB培养基中的培养时间不同，这也可能会导

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问我想请问一下如何寻找某一种糖基化修饰相关的糖基因或者酶基因呢？我前期通过实验发现某个抗体阳性的患者中，其贝塔-N-乙酰氨基葡糖胺

loveliufudan

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问设计扩cDNA的引物是否需要去内含子？如何找到一段DNA序列的内含子？

loveliufudan

设计扩增cDNA的引物时，是否需要包括内含子取决于您想要扩增的片段是否跨越了内含子区域。如果您想要扩增的片段跨越了内含子，那么您需要设计跨越内含子的引物。如果您想要扩增的片段不跨越内含子，那么您可以设计内含子保留的引物，这样可以减少设计引物的难度和复杂性。找到一段DNA序列的内含子，可以尝试以下几种方法：基于已知转录本的查询：如果您的实验物种已经有已知的转录本序列，您可以使用在线工具或者本地软件，

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问Hh信号通路中调节与Smo泛素化和去泛素化？

loveliufudan

下面是关于Hh信号通路中Smo泛素化和去泛素化调节的一些具体过程：泛素化：Smo的泛素化是通过E3泛素连接酶进行的，其中最重要的E3泛素连接酶是SPOP（speckle-type POZ protein），它能够将Smo的Lys751位点泛素化。Smo泛素化的结果是将Smo降解并抑制Hh信号通路的传导。去泛素化：与泛素化相反，Smo的去泛素化是通过去泛素化酶进行的。目前已知的Smo去泛素化酶包括U

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问求助，请问这是染菌了吗？

loveliufudan

很明显的细菌污染，建议加强培养物和实验设备的无菌控制、更换新的细胞培养物。

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问细胞贴壁看不清楚

土井挞克树

不是本身的特性，这个细胞本身贴壁可以看清，考虑细胞密度低或者状态不好

4 回答268 围观

问帮我看看HepG2细胞

sswei

可能细胞在冻存以前就生长不良或者冻存过程中损伤过大。

3 回答395 围观

问细胞因子刺激细胞时加过量了

sswei

在一些情况下，若T细胞不能消除免疫刺激源，会导致负反馈回路的形成，进一步抑制免疫反应。

4 回答556 围观

问求助Ⅰ过敏性鼻炎大鼠造模鼻腔出血是什么原因？

sswei

氢氧化铝会致鼻腔粘膜干燥出血，需适当降低氢氧化铝的量。

3 回答652 围观

问免疫组化求助

balalaLy

优化实验条件最好不要同时改变多个因素。建议先用1:50的浓度延长孵育时间，如果做出来了再调整浓度。如果再做不出来，建议你考虑更换抗体或者是不是你的样品不表达。

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问Jurkat/MA cells 是什么细胞啊？

汤姆卜丽波

是杂交细胞，同时具有两种细胞的遗传基因和特征

3 回答600 围观

问求助：买的通过流式检测的抗体，可以用酶标仪来测吗

汤姆卜丽波

应该也是可以的，像做elisa一样然后测显色就可以

3 回答388 围观

问SD大鼠睾丸支持细胞提取分离培养

loveliufudan

在使用两步酶消化法提取睾丸支持细胞的过程中，消化完胰酶后，一般需要离心沉淀并弃掉胰酶，避免其影响后续的细胞培养。然后再加入FBS停止消化，并通过过滤器过滤掉组织碎片等杂质。上清里的细胞可以一起倒掉，收集下来的细胞沉淀进行细胞培养。对于SD大鼠睾丸支持细胞的培养，一般需要使用DMEM或DMEM/F12培养基，加入10%胎牛血清或FBS等生长因子和抗生素抗菌素，可以在37°C、5% CO2条件下进行培

2 回答629 围观

问dsRNA质量检测标准

汤姆卜丽波

一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是<2.2的）。当R<1.8时，溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显，你可以根据自己的需要决定这份RNA的命运。当R>2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了

3 回答1059 围观

问番茄组培接种番茄种子暗处理后有一罐种子发芽特别少，这是为什么呢？

汤姆卜丽波

有可能是你蒸馏水洗的不够导致有细菌保留，和种子竞争培养基

2 回答558 围观

问3T3-l1细胞有没有诱导分化之后再做转染的情况，如果有需要什么条件才可以进行呢？

汤姆卜丽波

没什么特殊条件，和正常转染一样，lipo2000瞬转或者慢病毒稳转都可以

3 回答247 围观

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