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实验问答

23,125,383 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问原代细胞实验中，培养液的PH值变化太快，可能是什么原因导致的？

loveliufudan

原代细胞的培养条件非常重要，其中培养液的pH值是一个重要的因素。如果培养液的pH值变化太快，可能有以下几种原因：细胞代谢产物的积累：细胞在培养基中生长繁殖时会产生代谢废物，这些代谢产物会改变培养基的pH值。如果培养基中细胞密度较高，代谢产物积累的速度就会更快，导致pH值的变化更加剧烈。培养液的缓冲能力不足：缓冲液是调节pH值的重要组成部分，如果培养液中缓冲能力不足，就会导致pH值的变化过快。气体平

3 回答673 围观

问有大佬做过Protein Thermal Shift的Tm的实验吗，求解

土井挞克树

把曲线输出的纵坐标相应延长，避免曲线聚集

1 回答389 围观

问为什么包病毒收的上清液很黄，但是离心完的上清液很红？

loveliufudan

黄色的上清液可能是由于胆固醇等脂质类物质或者其他代谢产物的积累导致的。如果在48h和72h收上清液时都出现了这种情况，可能与细胞类型和病毒载体有关。至于上清液离心后呈现红色，并且病毒沉淀很少，这可能是由于以下原因：剩余血清的影响：如果病毒载体中残留了较多的血清成分，在病毒沉淀时可能会与病毒一起沉淀下来，从而使上清液呈现出红色。此外，血清的蛋白质和其它成分可能会干扰病毒的沉淀和浓缩。病毒的沉淀能力：

2 回答758 围观

问请问有用过IPP软件计算肾小球Masson染色后的胶原沉积积分CVF，具体的操作步骤是什么？

loveliufudan

1.打开IPP软件，导入Masson染色后的图像文件，将图像转换成灰度图像。2.选择“Measure”菜单，点击“Set Scale”选项，设置图像的比例尺。3.选择“ROI”菜单，使用鼠标或者其它工具选定感兴趣的区域，即肾小球区域。4.选择“Threshold”菜单，设置图像阈值，以分离胶原和其它组织成分。可以使用自动阈值或手动调整阈值的方式。5.点击“Analyze”菜单，选择“Measure

2 回答551 围观

问硫酸铵溶解度25度时饱和溶液为4.1M，即767克/升。分子量为132.12，怎么算的！求解？

loveliufudan

硫酸铵的分子量为 132.12 g/mol。饱和溶液的浓度为 4.1 M，即 4.1 mol/L。饱和溶液的密度为 767 g/L。根据浓度和分子量的关系，可以计算出每升溶液中硫酸铵的质量为：4.1 mol/L × 132.12 g/mol = 542.292 g/L因此，1 L 饱和溶液中硫酸铵的质量为 542.292 g。由于饱和溶液的密度为 767 g/L，因此 1 L 饱和溶液的体积为：1

1 回答1864 围观

问细胞复苏培养过程中，多久可以生长增倍？

loveliufudan

对于常见的细胞系，如HEK293、NIH3T3等，通常需要1-3天左右才能看到明显的生长增殖。对于一些较为敏感或者容易死亡的细胞，如原代细胞、淋巴细胞等，可能需要更长的时间来进行适应和恢复。需要注意的是，在细胞复苏后，生长增殖的速度和质量可能会受到多种因素的影响，如培养基成分、pH值、温度、CO2浓度等。为了获得较好的生长增殖效果，建议在细胞复苏后逐渐适应新的培养环境，并对培养基进行调整和优化。

4 回答974 围观

问细胞分瓶后第二天悬浮细胞多

此用户已注销

出现漂浮细胞有好几种可能第一是细胞死了，就漂起来了第二是在处理细胞的时候温度变化太大，建议预热培养液如果是用玻璃瓶培养的话改用塑料瓶试试可以半量换液

3 回答320 围观

问细胞长着长着就污染了，拉丝，然后用支原体检测试剂盒检测为阴性，很莫名其妙

loveliufudan

针对您所描述的情况，细胞长时间培养后出现污染，但支原体检测试剂盒检测为阴性，有可能有以下几个原因：支原体检测试剂盒的灵敏度不够高，未能检测出污染的支原体。虽然支原体检测试剂盒的灵敏度较高，但是有些污染可能存在变异性，检测不出来。污染可能是其他类型的微生物，而不是支原体。细胞污染不仅仅局限于支原体，可能存在其他微生物的污染，例如细菌、真菌等。细胞污染可能已经过度，支原体已经被细胞吞噬或其他细胞已经被

4 回答738 围观

问悬浮细胞培养前几天很好，冻存到液氮里，在复苏前两天也还好，之后就贴壁了为什么？

loveliufudan

悬浮细胞通常是在无血清培养基中培养的，这种培养基通常不包含血清中含有的黏附因子，因此这些细胞不会黏附在培养皿的底部。当您将这些细胞冻存并重新复苏时，有可能在复苏过程中或者在接种到新的培养皿中的过程中，细胞会受到一些创伤或者应力。这些应力可能会导致细胞产生一些黏附分子或者表达一些黏附因子，这些因子可以使得细胞黏附在培养皿的底部，从而形成贴壁细胞。此外，如果培养皿表面没有很好的预处理，比如没有涂覆一些

3 回答200 围观

问细胞培养所使用的FBS需不需要灭活？

loveliufudan

通常情况下，使用的胎牛血清(FBS)不需要进行灭活处理。因为FBS作为培养基中的营养物质来源，其内含有的生物活性物质和细胞因子对于细胞生长和增殖是非常重要的。而进行灭活处理会使这些生物活性物质失去功能，从而影响到细胞的生长和生理活性。但是，如果需要进行一些特定的实验，例如检测病毒或者细胞因子等，需要保证实验体系的无菌和清洁，并排除FBS中存在的病原体或细菌的可能性，那么可以考虑使用经过灭活处理的F

4 回答1140 围观

问细胞传代如何减少后代凋亡问题

loveliufudan

在细胞传代的过程中，后代细胞凋亡是一个普遍存在的问题。以下是一些可能有帮助的方法来减少后代细胞凋亡问题：1.控制细胞密度：在进行细胞传代时，应该控制细胞密度。如果细胞密度过高，会导致细胞营养不足和相互竞争，从而增加细胞死亡率。如果细胞密度过低，则会导致细胞无法良好地生长和分裂。因此，应该根据细胞类型和生长特性来确定适当的细胞密度。2.选择合适的培养基：合适的培养基可以提供必要的营养物质和适宜的生长

3 回答480 围观

问cDNA跑PCR跑不出条带怎么办呀

橙汁儿青柠味

首先确定引物是否正确，其次调整pcr条件，如增加模板量，降低退火温度等等

3 回答2723 围观

问请问用于单细胞检测样本负80冰箱里能够保存多久？

橙汁儿青柠味

一般放一年内都还行，不过建议还是用新鲜样品

3 回答4610 围观

问各位大佬，有无创取微量组织的方法吗

sswei

玻片压诊法，皮肤胶带粘贴法等无创取微量皮肤组织。

2 回答476 围观

问WB条带比预测分子量大，公司建议去糖基化

橙汁儿青柠味

首先蛋白条带过大可能是存在修饰，但得确定是否是糖基化修饰，提完的蛋白按照它这个步骤操作是可以的

2 回答1185 围观

问组织里的蛋白ip不下来

橙汁儿青柠味

那有可能是蛋白量不够或在IP处理过程中样品丢失了

4 回答674 围观

问跑WB时内参跑不出来？

橙汁儿青柠味

样品应该是浓度太低，导致测不到条带。首先分批次收货的样品可以暂存-80，等全部收获后一起做蛋白定量，然后加buffer煮沸之后再进行分装冻存于-80

3 回答4043 围观

问各位大佬帮帮忙🥺 第一张是DNA的电泳图第二张是PCR后的为什么条带那么拖而且第二张最后一个是水为什么也Ｐ出来了呀？

橙汁儿青柠味

条带拖尾表明不纯存在杂志，水也能pcr出来，表明系统中存在污染，但如果分子量很小可能是引物二聚体

2 回答388 围观

问乳腺癌干细胞和乳腺癌干性是一回事儿吗

dxyc42u

这不是一回事，后者只是代表有干细胞部分特性的细胞

3 回答675 围观

问贴壁的哺乳动物细胞的转染实验完整做法

sswei

贴壁细胞的转染:在准备做细胞转染的前一天把细胞铺进细胞培养皿中，加入完全培养基培养24小时，使得细胞汇合度达到百分之六十到百分之八十。在转染前需要把完全培养基换成无双抗的完全培养基，以排除双抗对转染效率的影响。根据转染的细胞数不同选取适量的纯培养基分别稀释质粒和lipo3000，其中稀释完的质粒中加入p3000充分混匀后再加入稀释过的lipo3000中，把混合液轻柔的吹打混匀，室温孵育20分钟。孵

4 回答1317 围观

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