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科研学霸天团,48小时有问必答
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有大佬做过Protein Thermal Shift的Tm的实验吗,求解
土井挞克树
把曲线输出的纵坐标相应延长,避免曲线聚集
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问
cDNA跑PCR跑不出条带怎么办呀
橙汁儿青柠味
首先确定引物是否正确,其次调整pcr条件,如增加模板量,降低退火温度等等
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问
请问组织运输过程中如何保存?
橙汁儿青柠味
最好是用干冰运输和保存,如果不方便最起码也要用冰袋
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问
请问用于单细胞检测样本负80冰箱里能够保存多久?
橙汁儿青柠味
一般放一年内都还行,不过建议还是用新鲜样品
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问
3T3-l1细胞,前天复苏,今天发现有一两皿里面长了很多密密麻麻黑色的杆状东西,镜下可看到在动,污染了吗?暂时其他的几皿没看到
橙汁儿青柠味
应该是杆菌污染了,建议处理掉别污染其他细胞
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问
请问脂肪细胞这种圆圆的状态是怎么回事呢?是污染了,还是死了呢?
橙汁儿青柠味
没有污染也没有死亡,就是细胞发生老化或者分化了
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问
WB条带比预测分子量大,公司建议去糖基化
橙汁儿青柠味
首先蛋白条带过大可能是存在修饰,但得确定是否是糖基化修饰,提完的蛋白按照它这个步骤操作是可以的
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问
联合组学分析是将什么与什么相结合?
Dr_劉医生
联合组学分析是将不同组学数据(如基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学等)进行联合分析,以探究从基因到蛋白的全景图,发掘常规单个组学未能发现的新结果。
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问
组织里的蛋白ip不下来
橙汁儿青柠味
那有可能是蛋白量不够或在IP处理过程中样品丢失了
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问
跑WB时内参跑不出来?
橙汁儿青柠味
样品应该是浓度太低,导致测不到条带。首先分批次收货的样品可以暂存-80,等全部收获后一起做蛋白定量,然后加buffer煮沸之后再进行分装冻存于-80
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问
各位大佬 帮帮忙🥺 第一张是DNA的电泳图 第二张是PCR后的 为什么条带那么拖 而且第二张最后一个是水 为什么也P出来了呀?
橙汁儿青柠味
条带拖尾表明不纯存在杂志,水也能pcr出来,表明系统中存在污染,但如果分子量很小可能是引物二聚体
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问
跟别的实验室借的细胞,同样的培养基和条件,细胞形态不一样,为什么?
橙汁儿青柠味
可能细胞发生老化了,可以借一下代数比较靠前的细胞
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问
WB细胞蛋白取样后直接煮了放-20℃,隔几个星期后跑内参没有条带,加了蛋白酶抑制剂,还是降解了吗?
橙汁儿青柠味
应该是降解了,蛋白保存建议放-80,-20只适合短期保存
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问
flowjo使用插件flowai时一直卡在calculating怎么办,求大神解疑!
Dr_劉医生
还是内存的问题,一直在处于运行计算中(报错in calculating),或者数据文件过大也会导致的。您可以尝试关闭其他程序,释放内存,或者将数据文件分批处理。
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问
乳腺癌干细胞和乳腺癌干性是一回事儿吗
dxyc42u
这不是一回事,后者只是代表有干细胞部分特性的细胞
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问
关于构建GSMM过程中粗模型的构建
Dr_劉医生
构建GSMM模型时,需要收集的数据信息包括:代谢物质的组成、反应物质的组成、反应物质之间的反应关系、反应物质之间的代谢通路关系、代谢物质之间的代谢通路关系等
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问
流式固定破膜分选完的细胞还能提RNA和免疫荧光吗
Dr_劉医生
流式分选后对RNA提取的影响是存在的。但是,如果你使用TRIZOL等有机溶剂进行RNA提取,那么流式分选后的细胞仍然可以用于RNA提取。
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问
贴壁的哺乳动物细胞的转染实验完整做法
sswei
贴壁细胞的转染:在准备做细胞转染的前一天把细胞铺进细胞培养皿中,加入完全培养基培养24小时,使得细胞汇合度达到百分之六十到百分之八十。在转染前需要把完全培养基换成无双抗的完全培养基,以排除双抗对转染效率的影响。根据转染的细胞数不同选取适量的纯培养基分别稀释质粒和lipo3000,其中稀释完的质粒中加入p3000充分混匀后再加入稀释过的lipo3000中,把混合液轻柔的吹打混匀,室温孵育20分钟。孵
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问
网状meta分析相对危险度及其95%置信区间RR(95%CI)很大,如图。
Dr_劉医生
首要原因是异质性过大,删除掉不适合纳入标准的研究;其次,是样本量过少,可以适当增加研究数量
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问
药物体内外作用机制不一样
Dr_劉医生
药物体内外作用机制不一致时,需要针对不同的模型进行实验,以反映药物作用的本质及与治疗指征相关的模型。比如要开发一个抗肿瘤药物,就应该选用相应的肿瘤模型,而不能选择糖尿病模型。此外,非临床药效学研究应结合化合物特点,拟定的临床方案等设计实施,在临床前初步探索化合物的作用机制,抗肿瘤活性以及药效的时程依赖性。
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