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问
pc12细胞传代次数过多会出现细胞团块吗,这种是正常的吗
土井挞克树
传代过多,细胞密度过大就会出现细胞团块,建议适当降低细胞密度
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问
请教。我有一个目的片段大小在210,熔解曲线跑出的tm值达到了93,这个正常么,有人说温度越高,特异性越好,是这样么?
juyue2010
正常,这个与你扩增的目的条带gc含量有关
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问
PCR扩增产物不是预期的条带,哪里出了问题?
juyue2010
可能设计引物时用的是cDNA,忽略了基因组上内含子
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问
细胞培养的支原体污染
loveliufudan
在贴壁细胞培养中,常常会出现一种称为“黑胶虫”或“黑粉虫”的污染物,这些污染物主要是由一种叫做“黑色真菌”的微生物所产生的,因其外观呈现黑色而得名。黑色真菌通常是通过空气传播而来,在培养室中会广泛存在,当其落在培养基上并找到适宜的生长条件时,就会在培养基上繁殖生长,并形成黑色的菌落或小粒子,从而污染培养物。这些黑色污染物并不一定是支原体,因此不能简单地将它们视为支原体,而应该进行进一步的鉴定。黑色
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问
单细胞蛋白质组中应用单分子测序技术,但蛋白质有20种不同的氨基酸,加上翻译后修饰,繁杂的工作量,怎么明确进行区分?
土井挞克树
可以做空间组学区分,空间组学会根据序列和位置进行区分
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问
ALP标记抗体方法步骤?
土井挞克树
流程:过碘酸钠氧化-乙二醇终止-加入抗体-碳酸盐透析-硼氢化钠还原-硫酸铵沉淀-溶解透析。
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问
CTAB法提取RNA
土井挞克树
CTAB提RNA步骤:1.取1.5ml的离心管加入1ml预热的CTAB缓冲液(亚精胺)(65度),加20ul(β-巯基乙醇)。2.取材料研磨加入1.5ml的离心管中65度,10min(15min)加热,期间多次震动,摇匀。3.取上清至另一1.5ml加入等体积氯仿异戊醇(24:1)振荡摇匀,4度,12000rpm,10min离心,取上清至另一1.5ml的离心管中。4.重复一次。取上清至1.5ml的离
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问
HepG2细胞出现小亮点,怀疑是白色念珠菌,但24小时培养基仍是澄清的,数量增加。高倍镜下观察没有动,且板里存在黑胶虫污染
sswei
培养基不浑浊,就有可能是细胞碎片,这种一般是细胞死亡裂解导致,原因有:1.营养或培养条件不行,细胞死亡;2.黑胶虫污染。
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问
我跑出来的Co-IP,为什么IgG有很浓的条带
土井挞克树
igG条带很浓可能是样品被蛋白酶降解导致的,建议添加蛋白酶抑制剂,且所有操作保持4℃以下冰上操作并防止冻融。
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问
igg组拉不出诱饵蛋白但能拉出捕获蛋白是怎么回事呀 igg和ab组都能拉出来诱饵蛋白
loveliufudan
如果在 Co-IP 实验中,IgG 组无法拉出诱饵蛋白,但能拉出捕获蛋白,可能有以下几种可能的原因:抗体的特异性问题:IgG 组中的抗体可能不够特异性,容易发生非特异性结合,因此无法富集诱饵蛋白。可以尝试使用更特异性的抗体或优化抗体浓度。Co-IP 条件的优化问题:Co-IP 实验中的洗涤条件非常重要,如果洗涤条件不足以去除非特异性结合的蛋白,就可能影响诱饵蛋白的富集效率。可以尝试增加洗涤次数、延
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问
请问26147试剂盒为什么洗不掉重链呀?频率还比较高
土井挞克树
重链洗不掉可能是交联作用太强了,可以加用裂解液增强洗脱
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问
关于用只识别天然蛋白的二抗,去除轻重链。洗脱下来的IP抗体是变性的,为什么目标蛋白不是变性的?
土井挞克树
大概率是因为环境不同,如ph,温度的差异导致ip抗体变性。
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问
裂解液如何选择? 如何做泛素化的IP,条带怎么看
sswei
用于普通的Western、IP或co-IP,推荐使用Western及IP细胞裂解液,另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。对于某些特殊蛋白的IP,如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高,即非特异的蛋白也被IP下来,则需要选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中
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问
同一细胞系,用相同载体构建的不同基因的稳转株可以用相同的对照吗?
冰芷汀
同细胞株相同载体构建的可以用之前的
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问
黑胶虫污染,会影响动物造模实验吗
那兔那兔
黑胶虫污染会影响结果的准确性。
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问
单细胞测序是否需要生物学重复?一般需要多少个才可以?
sswei
临床样本在开展单细胞实验时,每组样本能至少达到6-8例;非临床样本开展单细胞转录组测序,每组样本数能至少达到5-6例。
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问
细胞消化的过了影响后续的功能试验吗
那兔那兔
会影响,细胞消化过了会影响试验
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问
选错胰酶伤害过的细胞养起来还能正常使用吗?会影响后期实验结果吗?
冰芷汀
不建议使用,会影响后期功能试验
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问
如何利用stata比较两组数据的相关性?
土井挞克树
建议你计算Pearson相关系数来看两组数据的相关性:具体命令格式:correlate(简写:cor或corr)[varlist][if][in][weight][,options]在Stata中,命令corr用于计算一组变量间的协方差或相关系数矩阵;命令pwcorr可用于计算一组变量中两两变量的相关系数,同时还可以对相关系数的显著性进行检验;option选项中加上sig可显示显著性水平:pwco
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问
细胞冻在负80冰箱忘记了,半年后拿出来复苏会影响细胞的功能吗。
loveliufudan
长时间存放在负80℃的条件下可以帮助保护细胞,并确保其在复苏时保持较好的功能。一般情况下,细胞在负80℃的环境下保存长达数年也是可能的。因此,如果您将细胞存放在负80℃的冰箱中半年,通常情况下不会对其功能产生太大影响。然而,细胞存储在负80℃的环境下也需要一些特定的保存和恢复方法。在进行复苏之前,应该使用适当的冻存液体对细胞进行保护,并在复苏前将其缓慢回温。此外,细胞在冻存和解冻过程中也容易受到损
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