实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请问怎么确定293T细胞饥饿同步化成功了。怎么选择细胞同步化的时间？

dxy_lsec

血清饥饿法：293T细胞通常需要24-48小时的血清饥饿才能对血清饥饿作出反应，90%以上的细胞群体应处于G0/G1期

1 回答492 围观

问各位老师好，我想问下你们在养细胞做铁死亡模型时，铁死亡诱导剂(erastin)用的多少浓度铁死亡抑制剂（Fer-1）用的多少浓度

dxy_xyq401m2

https://www.medchemexpress.cn/Erastin.html和https://www.medchemexpress.cn/Ferrostatin-1.html，这两个可以通过产品链接带的计算器计算

1 回答505 围观

问PCR不同板子之间的CT值是否可以比较，如何进行板间校正？

huang282815

进行标准曲线的标定，且每版带上几个标准品进行一起实验即可进行板间矫正

1 回答413 围观

问急急急，做了快两个月了，质粒和连接产物转化平板无菌落

gyzyxy

跟我遇到的问题类似，我觉得是感受态细胞的问题。建议你重新制备感受态细胞，就用你买的感受态细胞就可以，方法可以参考：滕丽雯. 大肠杆菌 BL21(DE3)感受态制备及转化影响因素的研究. 齐鲁工业大学，2021.。这种方法不要热激，我试过了，效果很好。

2 回答675 围观

问请问WB条带拖带是怎么回事？是样品有什么问题，需要怎么处理?

dxy_0bykrvc8

有可能是细胞没有裂解完全，有大片段基因组（上样时感觉会堵针头或粘稠），可以进行超声，时间久点，但要确保超声时候温度不能过高及起沫。也有可能是样品蛋白浓度较大（可通过看内参是否“手拉手”）

1 回答395 围观

问在无菌操作中常见的操作方法？

TCMK110302

酒精消毒台面，紫外线照射台面和房间，高压蒸汽灭菌器材，细菌过滤器过滤无法高压蒸汽灭菌的液体

1 回答424 围观

问为什么不加模板也会pcr出和自己大小差不多的条带呢大约400bp左右，所有污染也排查过，连引物都重新用干粉稀释的，难道酶里面有

huang282815

建议把扩出来的带，送测序。看具体序列是什么。怀疑是实验室发生了气溶胶污染

1 回答171 围观

问阳性质粒转化涂板后菌落很乱

gyzyxy

1.圈出来的是什么意思？2.不大可能会污染，因为有抗生素。3.可以试试蓝白斑筛选。

1 回答415 围观

问CAS检测铁载体实验：对照组OD值比实验组的小

dxy_wwcmtiye

你好，请问问题解决了吗，我也遇到了这个问题，不知道为什么

1 回答482 围观

问Graphpad 8.0 出现了bug

dxy_nqd4f5w6

我也遇到了这个问题，好兄弟解决了吗

4 回答2507 围观

问有人用过Sebomed basal medium养SZ95皮脂腺细胞吗？和DMEM养出来有大的区别吗

loveliufudan

Sebomed基础培养基是一种常用的细胞培养基之一，用于支持皮脂腺细胞（如SZ95皮脂腺细胞）的生长和维持。与DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）相比，Sebomed基础培养基具有一些特定的配方和优势。Sebomed基础培养基是专门为皮脂腺细胞培养而设计的，它包含了与皮脂腺细胞生长和分化相关的重要成分和营养物质。这种培养基通常提供更适合皮脂腺细胞的生长条

4 回答1374 围观

问动物肠组织WB不好跑

摸着石头过河ing

请问你用的是小鼠的结肠组织吗，匀浆的时候用的组织量是多少mg勒

5 回答2031 围观

问毕赤酵母GS115感受态制备

loveliufudan

对于毕赤酵母GS115的感受态制备，一般情况下需要使用单菌落，因为酵母生长的方式与大肠杆菌不同，不能像大肠杆菌一样通过保种来制备感受态。酵母的生长速度较慢，需要一定时间才能达到所需的生长状态。因此，为了确保制备出高质量的感受态酵母，建议每次使用新的单菌落进行培养。如果使用保种的菌进行培养，可能会导致酵母生长不良或感受态转化率低下等问题。如果您想加快酵母生长速度，可以适当调整培养条件，如增加培养温度

3 回答4162 围观

问求助！！双荧光素酶检测海肾荧光素酶值低！！求求！！

初秋丶NI0Q

求助！！我也是在敲低和NC组中转染TOP/FOP质粒、海肾的荧光值只有几千，而TOP和FOP都是几千万。已经是TOP:海肾RLUc的质粒比1：10了

3 回答2081 围观

问共培养的同源性问题

loveliufudan

可以将OT-1小鼠的CD8+ T 细胞与人的肿瘤细胞共培养，但是需要注意以下几点：免疫原的同源性要求：OT-1小鼠的 CD8+ T 细胞特异性识别的是小鼠来源的 OVA 肽段，而人的 OVA 蛋白与小鼠 OVA 蛋白的序列有所不同，因此不能直接用人 OVA 诱导 OT-1 CD8+ T 细胞的激活。如果要用人的 OVA 来刺激 OT-1 CD8+ T 细胞，需要将人 OVA 中与小鼠 OVA 相对

4 回答1181 围观

问wb结果为什么背景比较黑且条带不清晰？

balalaLy

一抗二抗浓度高，或者洗膜不充分，适当调低抗体浓度，增加洗膜时间，或者提高洗膜液中tween20的浓度

6 回答13344 围观

问请问一下，细胞传代一般传到第几代就和原代细胞差别较大了呀？或者说可以从哪些方面判断细胞特性是否改变呢？

loveliufudan

细胞在传代过程中会发生一些改变，这些改变可能包括细胞生长速率的变化、形态特征的改变、细胞表型的变化、基因表达模式的变化等，这些变化会导致细胞特性的改变。一般来说，细胞传代的代数越高，细胞的特性差异越大。一般认为，在进行细胞实验时，可以传代3~15代的细胞使用，但具体传代多少代需要根据不同的细胞系和实验要求来确定。一些细胞系可以传代很多代而不发生明显的改变，而另一些细胞系只能传代很少的代数。判断细胞

5 回答1004 围观

问请问可以使用SPSS进行Cox回归预测模型bootstrap验证吗？

土井挞克树

可以使用SPSS进行Cox回归预测模型bootstrap验证

4 回答1852 围观

问求问各位大神，如何区分小白鼠的肠子类型，并干净分离出来？

汤姆卜丽波

胃下部是十二指肠，小鼠直肠和结肠一般通过回盲瓣或者直径来区分。结肠从回盲瓣分为盲肠、升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠，下部与直肠相连。

4 回答19600 围观

问本人做双向免疫扩散试验，鉴别人血白蛋白。扩散后能看到明显的白色条带，但用氨基黑染色半小时，洗脱24小时后，在加样孔四周仍是黑色一

小心居居拿狙狙你

你好，请问问题解决了么，是否因为浸泡时间太短

3 回答771 围观

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