实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请问透射电镜观察细胞线粒体，自噬小体前的收样准备工作时，可以用胰酶消化法收集细胞样本吗？胰酶会破坏细胞超微结构吗？

loveliufudan

为了尽量保护细胞的超微结构，在进行透射电镜样本的制备时，一般推荐采用更为温和的细胞分离方法，比如机械搅拌或使用酶混合物如胰酶和EDTA的低浓度溶液。并且要尽量缩短酶的作用时间，避免对细胞的超微结构产生破坏。总的来说，可以用胰酶进行细胞分离，但是需要严格控制胰酶的作用条件，以保护细胞内部的超微结构。同时，在收集细胞样本后，需要迅速进行固定和包埋等后续步骤，以防止细胞结构的进一步破坏。

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问mtt法细胞活性检测？

loveliufudan

如果在MTT染色后弃掉培养基，并让培养板晾干2-3天后再加DMSO溶解产物测OD值，可能会影响结果。首先，形式氢氧化物（Formazan）晾干后可能会难以用DMSO完全溶解，这可能会导致您的OD读数偏低，无法准确反映活细胞数量。其次，长时间晾干可能导致形式氢氧化物的降解。虽然形式氢氧化物相对稳定，但在暴露于空气和光线下的情况下，它可能会部分降解，这同样会使得OD读数偏低。因此，为了获得准确的实验结

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问同一cDNA模板，同一引物，熔解曲线有单峰有双峰？

loveliufudan

这可能是由于以下原因： 1. 引物二聚体（primer dimer）：当引物的浓度过高或者PCR条件不合适时，引物可能会相互之间形成二聚体。这些二聚体在熔解曲线分析中可能会显示为一个额外的峰值。 2. 非特异扩增：如果PCR条件不理想或者模板DNA污染，可能会导致非特异扩增，这也可能在熔解曲线分析中表现为一个额外的峰值。 3. 引物或模板的退火温度差异：如果引物或模板有不同的退火温度，可能在熔解曲

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问GC-MS前处理怎么判断是否需要衍生

loveliufudan

判断样品是否需要衍生化的关键因素包括： 1. 样品的挥发性：如果样品中的化合物不能在GC的工作条件下挥发，则需要进行衍生化。这通常涉及到极性、热稳定性和分子大小的问题。 2. 样品的化学稳定性：如果样品中的化合物在GC的工作条件下会分解或反应，则可能需要进行衍生化以提高其稳定性。 3. 需要提高化合物的检测灵敏度或选择性：通过衍生化，可以改变化合物的化学性质，提高其在GC-MS中的检测灵敏度或选择

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问MTT孵育完之后弃掉上清，4天后再加DMSO测OD可以吗？

sswei

在加入MTT后,一般到4小时即可得到比较好的结果,但是时间过得太长之后再进行测定,会对结果产生误差,所以不要考虑时间过得太长再进行测定.

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问Protocol 里面写的PBS清洗细胞的时候，是每次都需要重新离心细胞并吹匀吗？

loveliufudan

在很多情况下，使用PBS洗涤后，会通过吸取去除PBS，而不需要再进行离心。然后加入新的缓冲液或试剂直接进行下一步的实验操作。这样操作的原因是，频繁的离心可能会对细胞造成压力，甚至可能导致细胞损伤。但在某些情况下，例如在需要完全清洗掉PBS，或者需要收集细胞进行下一步实验时，你可能需要在PBS洗涤后进行离心，并用吹管吹匀悬浮细胞。

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问检测细胞的GFP绿色荧光表达，样品需要计数吗？

烧伤科常医生

可以取一部分细胞进行流式，细胞密度不同会有影响

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问hepg2细胞状态问题

dxyc42u

有可能是消化过度了，下次消化时间短一点

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问同源重组连接产物可以用于电转吗

烧伤科常医生

同源重组的特点：A.涉及同源序列间的联会配对，且交换的片段较大。B.需要重组酶C.涉及DNA分子在特定的交换位点发生断裂和错接的生化过程（异源双链区的生成）D.单链DNA分子或单链DNA末端是交换发生的重要信号。E.存在重组热点。可以用于电转。

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问磁珠纯化可以用于连接产物脱盐吗

烧伤科常医生

磁珠纯化可以用于连接产物脱盐。

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问动物实验中，邮票皮植皮，邮票皮如何制备？

sswei

操作步骤：1．术前准备（1）全身准备：同外科术前准备。对烧伤病人，除外科常规术前准备外，特别强调要纠正水、电解质和酸碱的失衡，纠正贫血及低蛋白血症，控制全身感染。一般情况下，患者应维持血红蛋白＞10g/L，血浆蛋白＞30g/L，无内环境紊乱，方可保证手术的成功。（2）供皮区准备：手术前一天剃毛，供皮区用肥皂水清洗。如为头皮供皮，可于术前剃除头发。（3）受皮区准备：对陈旧性肉

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问用大鼠做模型，烧伤创面植皮，多大算邮票皮植皮，多大算微粒皮植皮？

sswei

常见的邮票皮就是把皮切成就邮票一样，一片一片，成活率相对比较高一点，但是外观不太好；常规大小为0.5cm×0.5cm，最大不能超过1cm×1cm。微粒皮：目前大面积烧伤还用微粒皮，就是把自体皮切成很小，比芝麻还要小的颗粒，移植到受区以后，外面再盖上如生物敷料或异体皮，这种办法对大面积烧伤比较好，但外观、功能要稍微差点；一般以滚轴刀进行去皮，将皮片剪成0.1mm2 的微粒皮。

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问用种子液提质粒的时候没有条带

dxyc42u

很可能是质粒没有表达目的蛋白。

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问双抗体夹心ELISA空白对照假阳性

sswei

假阳性的出现通常是样本中掺杂有同源或同工物质。

3 回答506 围观

问请问哪里有培训ISO15189注册内审员的培训会？

dxyc42u

SO15189注册内审员培训会我们医院检验科搞的

3 回答356 围观

问可以用4%的多聚甲醛来固定细胞吗？

烧伤科常医生

可以用4%的多聚甲醛来固定细胞

5 回答7285 围观

问临界点干燥样本大小要求

烧伤科常医生

选取组织块长宽小于十毫米，高度小于五毫米

4 回答221 围观

问病毒核酸检测一般多少算作阳性

mistll8

根据你质控标准来吧每个实验室不一样

4 回答217 围观

问兔耳血液循环障碍要注意什么？

dxy_mqg1dtg8

注意以下几点可能有助于避免或减少兔耳血液循环障碍的发生：1. 确保兔子的饮食充足、均衡，提供足够的水和维生素，避免营养不良导致的贫血等问题。2. 经常检查兔子的体温、心率、呼吸等生命体征，及时发现异常并采取相应措施。3. 定期检查兔子的健康状况，发现疾病及时治疗，避免感染等问题。4. 给予适当的运动，防止长期缺乏运动引起的心血管疾病。5. 避免过度紧张、惊吓和不适当的处理方法，以免引起兔子的心理压

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问hepg2细胞形态及状态

dxy_epq4wjp9

麻烦各位细胞专家看一看，我养的hepg2，第一张是周日晚上拍摄，第二张周五上午拍摄，中间就隔了周六一天，为什么细胞形态会发生这么大的改变

4 回答1379 围观

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