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实验问答

25,275,059 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问如何设计质粒求求各位大佬帮忙

sswei

采用重组酶构建质粒方法1. 载体的制备一般推荐双酶切线性化，线性化完全，假阳性克隆低。酶切体系。2. 对于使用重组方式连接来说，PCR 要设计引物, 设计引物时要根据质粒载体和基因序列选择合适的同源序列，通过 PCR 扩增方式进行连接，PCR 的产物要纯化。引物设计原则简单总结一下：（1）前向引物：5’ 端--上游克隆载体末端同源序列+基因正向扩增引物--3’ 端（2）反向引物：3’ 端--基因反

3 回答669 围观

问从粪便中收集的虫卵能够用于提取目的DNA吗，收集的虫卵较少，且还有非目的基因的其他寄生虫

loveliufudan

是的，从粪便中收集的虫卵中可以提取DNA。不过，如果虫卵数量较少或者样本中存在其他非目标基因的寄生虫，这可能会对DNA提取和后续的分析产生影响。虫卵的DNA提取需要特殊的技术，包括物理破碎（如声波破碎）和/或化学破解方法，这是因为虫卵的外壳常常很难被传统的DNA提取方法破解。虫卵中的DNA数量较少可能会影响到DNA的提取效率，这可能需要通过增加样本量、优化提取方法或使用更敏感的检测方法来克服。此外

6 回答450 围观

问氨基酸的提取及检测步骤

sswei

氨基酸的提取（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）①细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为（500-1000）：1的比例（建议500万个细菌或细胞加入1 mL提取液）处理样品，冰浴超声破碎细菌或细胞（功率20%或200 W，超声3 s，间隔10 s，重复30次），沸水浴提取15 min（密封以防止水分散失），冷却至室温后，4℃ 10000

3 回答1977 围观

问中药红藤和败酱草治疗盆腔炎适合采用水提还是醇提？

loveliufudan

对于红藤和败酱草来说，主要的活性成分分别是氧化石蒜碱和败酱素。氧化石蒜碱是水溶性成分，更适合用水提取；败酱素是脂溶性成分，更适合用醇提取。但是具体到治疗盆腔炎，因为炎症反应主要是体内的免疫反应，不同的患者可能需要不同的药物成分来调控。因此，到底应该使用水提还是醇提，这可能需要考虑到患者的具体情况

5 回答450 围观

问siRNA敲降刺激后才升高的基因，什么时候加这个刺激，在转染siRNA同时，还是转染24到48h后。

loveliufudan

siRNA转染后通常需要一段时间（通常24-48小时）才能充分地敲降目标基因。因此，如果你想要在敲降后观察基因刺激的效果，你可能需要在转染siRNA一段时间后再添加刺激物。另一方面，如果你同时加入刺激物和siRNA，有可能在siRNA完全发挥作用之前，基因已经被刺激上升。这样可能会使得观察到的效果不准确。因此，通常建议的做法是先转染siRNA，等待24到48小时让siRNA发挥充分的敲降效果，然后

4 回答2342 围观

问求助大家，cck8实验，培养基中有还原性药物，检测时是要更换培养基吗？更换成普通培养基的时候，要用PBS清洗吗？容易把细胞洗没吗？

dxyc42u

检测时是需要更换培养基，可以用pbs洗涤，不会把细胞洗掉的

4 回答1983 围观

问如何用台盼兰计数活细胞？

dxyc42u

用无血清培养基把细胞悬液稀释到200~2000个/毫升，在0.1毫升的细胞悬液中加入0.1毫升的0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。

4 回答1665 围观

问细胞实验中经常出现的问题有哪些？怎样规避？

loveliufudan

在细胞实验中，常见的问题包括： 1. 细胞污染：细胞污染可能是由细菌、真菌、酵母或其他细胞类型的污染引起的。为了规避这个问题，建议在实验开始前进行无菌技术操作，使用无菌培养器具和试剂，以及经常监测和检查细胞的无菌性。 2. 细胞死亡：细胞在培养过程中可能会出现死亡，可能是由于细胞培养条件不适宜、细胞老化或药物毒性等因素引起的。为了避免细胞死亡，应该选择适当的培养基和培养条件，并且定期检查细胞的健康

5 回答2146 围观

问如何知道细胞培养液被污染了，下一步怎么办？

loveliufudan

要确定细胞培养液是否被污染，可以注意以下几个指标和观察： 1. 观察培养基外观：检查培养基是否呈现异常颜色、浑浊度或悬浮物。任何异常变化都可能是细胞培养液被污染的迹象。 2. 观察细胞形态：观察培养的细胞是否显示异常形态，如变形、聚集、不规则的细胞形状等。这些变化可能是污染导致的。 3. 观察细胞生长率：如果细胞生长缓慢、停滞或减少，可能是细胞培养液受到了污染的迹象。 4. 进行细菌培养：将一小部

5 回答1183 围观

问为什么要热灭活血清？

loveliufudan

热灭活血清的主要原因： 1. 消除病毒和微生物：血清中可能存在潜在的病毒、细菌或其他微生物。通过热处理，可以有效杀灭这些病原体，从而降低血清的感染风险。这对于细胞培养和实验动物的健康非常重要。 2. 保留其他生物活性成分：血清中含有许多对细胞生长和功能非常重要的生物活性成分，如生长因子、细胞黏附分子和免疫调节因子等。热灭活血清的目的是在杀灭病原体的同时尽量保留这些生物活性成分的功能。需要注意的是，

4 回答2409 围观

问WB转膜出现这种圆点是怎么回事啊，感觉和转膜夹上的一样大小

loveliufudan

可能是转膜夹有缺陷或损坏导致的。检查转膜夹是否完整，并尽量使用新的、无损坏的转膜夹。

4 回答707 围观

问过氧化氢诱导建模应该怎么选购呢？

loveliufudan

一般来说，购买过氧化氢应该通过专业的实验室试剂供应商或化学品供应商进行购买，这些供应商提供的过氧化氢通常符合实验室安全标准，但是去药店买“双氧水”也是可行的。

5 回答777 围观

问肉汤稀释法测mic实验结果怎么表示？实验现象怎么描述？有像elisa的结果表示方法吗？

loveliufudan

在肉汤稀释法测定最小抑制浓度（MIC）的实验中，通常是通过观察细菌或微生物在不同肉汤浓度下的生长情况来确定最低有效抑制浓度。这种方法通常没有直接的可量化测量结果，类似于ELISA的结果表示方法。在描述实验现象时，可以考虑以下几点：1. 可见生长抑制：观察不同浓度的肉汤对细菌生长的影响。在高浓度的肉汤中，细菌可能完全无法生长，出现完全抑制的现象。而在低浓度的肉汤中，细菌可能会有一定的生长，直到达到最

3 回答675 围观

问小鼠鼠源性胰腺癌细胞皮下瘤，放疗增敏给多少剂量合适

feixue7758527w

放疗增敏剂一般都是按体重计算的，有的是5mg/kg，有的是870mg/kg，具体要看你用什么放疗增敏的。

3 回答632 围观

问质粒提取浓度正常，但是比值总是超过2，是什么问题？

sswei

a260/a280大于2说明RNA没有除干净。需要对质粒纯化。

3 回答3612 围观

问干预CCK8检测细胞增殖

然吉儿

一般如果前期造模采用无或低血清，那么CCK8最好也用相同条件，这样保持实验条件前后一致性

4 回答1466 围观

问WB蛋白趋势对，但是条带大小大了15-20kda,不知道怎么回事

dxyc42u

有可能是mark的问题，换个别人的试试看

3 回答3248 围观

问细胞培养过程中的小黑点

烧伤科常医生

有可能是黑胶虫，细胞碎片，凋亡小体，血清中的沉淀或者是支原体的污染。

9 回答530 围观

问R语言gemtc包的结果里好多参数，哪个才是贝叶斯因子？

dxyc42u

要在R中通过专门的包进行转换的

4 回答401 围观

问细胞培养浓度太低，求助？

Keven轩

可以换口径更小的培养皿，并且减少培养基的使用体积

4 回答228 围观

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