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各位大佬们,MTT实验做了一个多月了都没做出结果,求求帮助!
1.我用的是4T1细胞,最开始是用1640来进行培养和做MTT,发现细胞状态不好,做出来的结果有些可以有些不行,我老板说是细胞状态的问题,但我怀疑是培养基的问题。
2.然后我就向别人要了一管新的细胞,用DMEM来培养和铺板,结果给DOX的几个梯度浓度细胞存活率都在100%左右或以上了,是不是不能用DMEM来做MTT啊。
3.实验步骤:4T1细胞以5×1undefined4个/ml的浓度,每孔100ul,12h过夜贴壁,加180ul无血清培养基和20ul梯度浓度的药物,培养24和48h,去除培养基加100ul无血清培养基和20ulMTT,孵育4h,去除再加150ulDMSO,振荡15min,在490nm测。
4.其他问题:(1)无血清培养基要加双抗吗?(2)在加药之前需要先用无血清培养基培养12h让它同步化再给药吗,我看有的人说要这样处理(5)吸光度值大是不是我给的细胞数量太多了?
5.下图是我的MTT吸光度值和细胞存活率
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