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        【求助】提取RNA提取不出来~求助

        丁香园论坛

        4986
        我是想提取RNA,然后在反转录,最后做荧光定量PCR。我用的标本是Hep-2喉癌细胞株,试剂盒是Biomiga_EZgeneTM Biozol RNA kit,每次收集50ml培养瓶里面的细胞,但是总是提取不出来RNA,条带上面也没有,郁闷之极,求解~
        难道降解了?
        尝试用其它提取方法,不妨用传统的提取法或许有意想不到的效果。
        我感觉是不是我收集细胞的时候有问题啊~或者我的手法不正确?
        感觉还是Trizol 的方法经典
        我们用的天根的试剂盒提的效果还不错呢!你可能裂解细胞的时候没有裂解好或者提取的过程中降解!
        你用trizol试试看!
        好的~谢谢大家~
        降解不会那么彻底的,估计是细胞数量可能太少....
        50ml培养瓶里面的细胞不够吗???
        1. 保证细胞数量要足够,提取的时候细胞应该铺70%以上.
        2.细胞裂解很关键,详细按照试剂盒的要求操作,保证有足够的裂解时间。
        3.试剂使用要规范,要严格使用进口无RNA酶的枪头进行操作。
        4.特此强调洗脱RNA的水一定要干净无RNA酶。
        如果还不能提取出来,可以更换提取方法,比如TRZOL法或者别的公司的试剂盒。
        可能是细胞裂解不完全或者是提取过程中降解 再者环境因素也是很重要的

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】提取RNA提取不出来~求助

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