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请教小鼠脾T细胞培养和测凋亡问题

相关实验:流式细胞仪检测细胞凋亡实验

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家飞的清

本人最近2个月在培养阴性分选出小鼠脾CD4,ConA 10ug/mL,按undefined10

^5个/孔,200uL培养基(培养基为20%FBS+1640+50um巯基乙醇+10ng/ml IL-2),养了第一天开始,细胞就出现了小团簇,逐渐增多,第三天是团簇非常大,不过还是看到一些死细胞,也有一些细胞变得没那么圆。在第2天时加了药物,在第3天时测凋亡。现附上2张养了3天的图,现在我有两个问题:1.体外养T细胞怎么样子才是在增殖,在增殖时会不会有死细胞,增殖时细胞会不会部分集中在周边;2.如果我这两张图是在增殖,那我这个凋亡为什么看起来细胞全死了,是我画门、电压问题还是哪里?3.为什么T细胞凋亡时分群不清楚,不像肿瘤细胞的凋亡图那样的。

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3 个回答

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huarenqiang5

有帮助

你这个情况主要还是考虑细菌污染导致的。

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土井挞克树

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增殖时会有死细胞,增殖时细胞会部分集中在周边

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loveliufudan

有帮助

1.在体外培养T细胞时,增殖通常伴随着一定数量的细胞死亡。细胞死亡可以是由于培养条件不佳、培养基中某些成分的缺失、过多的细胞密度等多种因素引起的。在增殖时,细胞会逐渐增多,并且可能会部分集中在周边。细胞数量的增加和聚集现象可以通过显微镜观察到。通常,为了避免过度增殖和细胞死亡,建议根据实验需要调整细胞密度和培养条件,比如更换培养基、降低细胞密度等。

2.从您提供的图片来看,凋亡图看起来可能存在一些问题。一方面,细胞门可能设置不够合理,导致某些细胞被误判为死亡细胞;另一方面,您在细胞凋亡前加了药物,不同药物的作用机制可能会导致不同的细胞死亡方式,例如坏死和凋亡,这也可能会影响凋亡结果的分析。建议尝试优化实验流程,包括药物选择和细胞门的设置,以提高凋亡结果的准确性。

3.肿瘤细胞和T细胞的调亡机制不同,因此凋亡图的表现也有所不同。在肿瘤细胞中,由于细胞本身的变异,可能会出现几种不同的亚群,凋亡图也会比较清晰。而T细胞的调亡主要是受到外界刺激和免疫调节的影响,因此可能出现各种不同的凋亡模式,凋亡图不如肿瘤细胞的清晰。

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