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- 流式细胞仪检测细胞凋亡
- 上海
- 2026年01月15日
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流式细胞仪检测细胞凋亡
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上海生博生物医药科技有限公司
细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。它是一个主动的，高度有序的，基因控制的一系列酶参与的过程。细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段：接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶的活化（Caspase）→进入连续反应过程。
磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS 高亲和力特异性结合。将Annexin V 进行荧光素（FITC、PE）或Biotin 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（propidine iodide，PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。
上海生博提供：按照客户实验方案对细胞进行药物或病毒感染等处理后，单染（PI）或双染(PI+Annexin V)细胞，利用流式细胞术进行细胞凋亡检测。
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文献和实验细胞凋亡的检测方法众多，流式细胞仪检测凋亡，是常用的方法。由于流式细胞仪固有的特点――可以准确的进行凋亡细胞的计数。因此，具有其它方法无可比拟的优越性。下面我们就简单明了地介绍流式在检测凋亡方面的应用。在凋亡诱导剂的作用下，首先是细胞色素C和apa f-1形成复合体，线粒体的功能发生衰退；后是caspase家族激活，磷脂酰丝氨酸外翻，这时细胞的形态已经发生了改变，可以看到细胞变小，胞核皱缩；最后是细胞内DNA断裂，形成凋亡小体。在凋亡发生的各个过程当中，都有相应的流式细胞仪的检测方法，可以采用
、结果五、原理Annexin-V 可以在钙离子存在的情况下，和细胞表面外翻的磷脂酰丝氨酸结合，而磷脂酰丝氨酸的外翻是细胞凋亡的早期事件。PI 是一种 DNA 染料，当细胞凋亡的晚期，细胞的细胞膜通透性增加，PI 从而进入细胞核与 DNA 结合。六、结果分析Annexin-V 阴性-PI 阴性 代表正常细胞 象限： 左下，活细胞的比例Annexin-V 阳性-PI 阴性 代表凋亡早期的细胞 象限： 右下，凋亡早期细胞的比例Annexin-V 阳性
、显微镜或流式细胞仪检测 A、荧光显微镜观察 1．滴一滴上述细胞悬液于载玻片，盖上盖玻片，于荧光显微镜下观察； 2．对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；用PBS洗涤细胞两次； 滴加100μL 1x JC-1染色工作液，加盖玻片，37℃，5%CO2的培养箱中孵育15~20min；1× JC- 1 Assay Buffer洗涤1~2遍；将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下观察。 检测JC-1单体时可以把激发光设置为490nm，发射光设置为530nm
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