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假想的世界
第一次快转后摇菌和中提质粒,所有抽提出来的质粒跑电泳都出现了非特异性条带,500bp左右。,中提试剂都跑电泳测试没问题的。请问是什么原因导致的?
bamboopiggy
你buffer1 里面加RNase了么?去除rna试试
dxy_gwrp7ndq
质粒的宿主菌是什么菌 遗传背景清楚吗,是否其本身就带有另外的质粒,导致非特异性条带
酶切的体系及反应条件、时间如何,有可能出现STAR活性
府宅
一:就时污染。你大提质粒的菌是从单菌落来的吗?有没有经过鉴定。污染有带有相它质粒的菌有可能出现这种情况。如果说缓冲液污染我倒觉得可能性很小。
二:提取质粒的程序是否仔细检查过。提取质粒时剧烈的操作手段常常会导致基因组污染或质粒正常结构的改变。
Eason老歌迷
没有这么小的质粒,肯定是非特异性条带或者是rna,如果质粒在后续做酶切有小片段的话,可能会被RNA挡住看不出来,那么你就需要酶切前把RNA消化掉。如果双酶切出来的片段都比较大,跑胶能看见带,那么这些RNA就不太要紧,不用处理。
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