(求助) 有人在做基底膜体外培养的螺旋神经节神经纤维免疫荧光染色吗？求解！

相关实验：原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法

SeaGoddd

2022-07-22

有没有人做过耳蜗基底膜体外培养后用neurofliament免疫荧光染神经纤维和螺旋神经节的？很久之前做过一次染出来过，最近做了很多次染不出来，Trion X-100用到1% +5%牛血清白蛋白+1:200 neurofliament 一抗4°C过夜，二抗用Alexa Fluor® 594 Goat anti-mouse IgG (minimal x-reactivity) Antibody 1:200，室温孵育2h，纤维染不出来。因为我的细胞是小鼠身上的，我用的一抗也是小鼠抗NF200，会不会是因为这个原因呢？

2 个回答

balalaLy

2022-07-23

有帮助

我4年前有做过，NF200确实不好染，实在染不好，你可以考虑换另一个Marker，或者用Neun，丁大连老师有一篇文章就是染螺旋神经节的，你可以找来看一下。

Eason老歌迷

2022-07-22

有帮助

既然你做出来，那就按照你之前的配比来做。这次不成功，可能组织中的抗原被消耗掉了,在拿那个组织重新做应该效果不好。最好重新取组织,一抗的孵育时间可以延长一点,二抗的浓度可以适量提高。我觉得应该和Triton X-100 的浓度关系不大,参考文献中用的10%,但是混合到一抗孵育液中的最终浓度仍然是1%。