【求助】有人做过稳转microRNA质粒到细胞系吗？
丁香园论坛
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将以构建的microRNA质粒稳转至细胞系，有人做过吗，分享一下。
我做过miRNA的稳转实验，我们可以进行交流。
版主zhujoker留言:
不要轻易留邮箱以及联系方式。可以站内PM，也不要变相打广告
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我已经构建了pcDNA3.1(+)-premiR的表达载体，正在准备细胞。据说，这个实验，细胞爱死？
还有，用G418溶于培养液后，用滤吗？
如何挑单克隆？
还有，用G418溶于培养液后，用滤吗？
如何挑单克隆？
我用pcDNA3.1做miRNA过表达，表达效率偏低，后改用psilencer后就好多了，所以建议用shRNA载体——仅是个人观点。
附件里是别人构建的文章，可以看看
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wingofwind1029：
你好，我在DXY上看到你的帖子，我最近准备验证microRNA是否与目标基因3'UTR区作用，需要pMIR-REPORT miRNA Expression Reporter Vector，不知道你现在有没有这个质粒，如果有能赠与我一份吗？刚开始自己做实验，经费很拮据，冒昧给你Email,不好意思打扰你了，谢谢，急盼回复
你好，我在DXY上看到你的帖子，我最近准备验证microRNA是否与目标基因3'UTR区作用，需要pMIR-REPORT miRNA Expression Reporter Vector，不知道你现在有没有这个质粒，如果有能赠与我一份吗？刚开始自己做实验，经费很拮据，冒昧给你Email,不好意思打扰你了，谢谢，急盼回复
稳转质粒已经过时了，转染质粒要用昂贵的转染试剂，而且转染效果很差。转染完细胞要经过近3个月的筛选，并且会出现质粒丢失的现象。很痛苦的。建议有钱还是搞腺病毒和慢病毒。整合到宿主DNA上稳定表达，不用筛选。这是现在比较好的构建稳转方法。质粒已经过时了。
慢病毒过表达miRNA
wingofwind1029：
您好，我的情况同suosuo302，最近准备做miRNA与目标基因3’UTR区的作用，需要用pMIR-REPORT miRNA Expression Reporter Vector，不知道你现在有没有这个质粒，如果方便能赠予我一份吗？如果买，大概多少钱呢？我看文章中用的都是Ambion的，在网上查了一下，有2000+的，也有900的，不知为什么差价会这么大。
以前实验做的都是SNP方面的，现在第一次开始做载体，所以有很多都不清楚，万望给予指点，谢谢
您好，我的情况同suosuo302，最近准备做miRNA与目标基因3’UTR区的作用，需要用pMIR-REPORT miRNA Expression Reporter Vector，不知道你现在有没有这个质粒，如果方便能赠予我一份吗？如果买，大概多少钱呢？我看文章中用的都是Ambion的，在网上查了一下，有2000+的，也有900的，不知为什么差价会这么大。
以前实验做的都是SNP方面的，现在第一次开始做载体，所以有很多都不清楚，万望给予指点，谢谢
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