培养鸡胚成肌细胞第四天绝大部分细胞都死了是为什么？
我不是云吞
最近在分离培养鸡胚的原代成肌细胞，细胞分离下来的时候状态不错，差速贴壁后一天换液时观察细胞状态还很好，在培养皿中长到 60% 左右密度。但是换液完第二天去观察细胞就发现细胞开始分化形成肌管，第三天观察细胞开始死亡，第四天，绝大部分细胞死完了。好几次实验都是这样，很纠结，培养基的血清浓度一直控制在 20%，不知道是哪一步出错了。
3 个回答
yasha110
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我虽然没养过，但是师兄一直在做，他的经验就是鸡胚胚龄很重要，大龄的胸肌分化过度，不好消化。
hbxiatian
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个人是做鸡胚心肌细胞的，手上将近做了有千鸡胚了，之前是在老外拿到的protocol，我们夏天做的时候用冰盒预冷，离心同样4度预冷，操作时最大程度降低细胞代谢活力，成纤维差速45min去除。我的经验是请保证培养基，培养箱处于正常工作状态，你的细胞可能是老化了，说明离体后细胞活力降低了很多，确定你的操作与之前的一样，鸡胚用胰酶消化问题不大，我的心肌细胞同样用胰酶消化，每次37度8min，冰上预冷最后消化完预冷离心，确定操作问题不大，那就详细详细检查培养基，培养箱。原代细胞最好是gibco的血清以及新鲜培养基，国内还没有可以代替的产品！供参考！祝好！
mumuyu1985
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会不会是成纤维细胞没有洗脱干净的缘故
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