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科研学霸天团，48小时有问必答

问小鼠原代皮层培养中的小型细胞是什么？

loveliufudan

根据您提供的信息，可以初步推测您观察到的是小胶质细胞。小胶质细胞是一类主要存在于中枢神经系统中的胶质细胞，其细胞体积较小，直径通常在5-10微米左右，可以通过染色来检测其存在。您提到观察到的细胞通过DAP!着色，这可能是因为您使用的是DAPI荧光染料，其主要靶向DNA分子，因此可以用来标记所有类型的细胞核。同时，您也可以使用其他标记来进一步确认这些细胞是否为小胶质细胞，例如CX3CR1或GLT-1

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问提取组织中线粒体，文献中用的是波伊匀浆器，我们只有超声和磁珠破碎，会破坏线粒体吗

loveliufudan

线粒体是一种相对脆弱的细胞器，因此在分离和提取过程中需要避免过度的机械剪切和物理力的破坏。超声和磁珠破碎方法都可以用于线粒体的提取，但是需要注意以下几点：优化处理条件：在超声或磁珠破碎过程中，需要优化处理条件，如时间、功率、温度等参数，以减小线粒体受到的机械剪切和物理力的影响。选择适当的缓冲液：选择适当的缓冲液可以保护线粒体不受蛋白酶和核酸酶的降解，同时也有助于减小线粒体的受损程度。快速离心：在超

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问求助，悬浮细胞测cck8

loveliufudan

可能存在以下几个问题：细胞密度过高：您在铺板时使用了1万个细胞，这可能导致细胞在生长过程中会产生自我抑制，影响其生长速度和代谢能力。建议尝试调整细胞密度，控制在5000个左右。细胞状态不佳：细胞状态不佳也可能是导致您CCK-8试验OD值上升缓慢的原因之一。您可以检查细胞是否有感染、过度培养或其他异常情况。此外，确保细胞在培养和铺板过程中没有受到过度的机械剪切和物理力，这也可能导致细胞受损。混匀不均

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问t细胞培养

dxy_fcipi1a0

我的T细胞加抗体刺激之后也这样，我之前还以为是提的不纯，刚刚铺孔的时候不是这样的

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问求助，β-actin双条带

土井挞克树

可能抗体原因，有的时候抗体重复用了多次就会这样

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问B16F10-Luc细胞这个样子是状态不好吗？还是污染了？传了两代的细胞，换个液就变这样了

土井挞克树

考虑是杂质污染了，可以加抗生素再观察观察

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问求助，CFSE摸浓度染色人PBMC后怎么看结果选合适的浓度，怎么做峰图

loveliufudan

CFSE是一种荧光染料，可以用于评估淋巴细胞增殖和分化。对于您的问题，您可以使用不同的CFSE浓度（通常在1-10μM之间）染色外周血PBMC，刺激培养5天，然后使用流式细胞术分析不同浓度CFSE染色的细胞增殖情况。您可以比较不同CFSE浓度下的峰图（即荧光强度与细胞数量之间的关系图），找到最适合的浓度。一般而言，如果染色浓度过高，会导致荧光信号饱和，而浓度过低则可能会影响细胞增殖的检测。峰图是通

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问肿瘤组织分离细胞培养详细步骤

balalaLy

酶消化成单个细胞培养，或者组织块培养。关键是不同的组织不同的细胞需要的酶和消化时间需要根据实际情况优化，还有最终的细胞纯化。

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问诱导骨髓间质干细胞为成骨细胞

loveliufudan

在诱导骨髓间质干细胞分化为成骨细胞的过程中，细胞漂浮可能是由于以下原因：细胞密度过高。高密度细胞培养容易导致细胞产生压力，从而导致细胞死亡和脱落。在培养细胞时应该注意控制细胞密度，避免细胞过度生长。细胞应激。细胞在不良的环境条件下会受到应激，从而导致细胞死亡和脱落。在细胞培养过程中，应该注意细胞的状态，避免给细胞造成不必要的压力和应激。细胞分化不良。如果细胞无法成功分化为成骨细胞，可能会导致细胞死

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问cck-8测量细胞活力时细胞密度的影响

龙大人驾到

调整CCK-8试剂与培养基的比例是有可能减少试剂与细胞结合饱和现象的，但同时需要注意CCK-8试剂的浓度不能太高，否则会导致其他问题，如在低细胞密度下会出现高背景读数等问题。因此需要在实验前进行一定的优化操作。除了CCK-8试剂外，还有其他可以用来检测细胞活力的指标，如LDH，MTT等。但每种指标都有其自身的局限性，需要根据实验需求选择适合的指标。对于您当前的实验情况，除了调整CCK-8试剂与培养

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问BV2小胶质细胞MTT法测细胞活力

loveliufudan

BV2小胶质细胞MTT法是用来测量细胞活力的常用方法之一。关于您的实验结果不稳定的问题，可能有以下几个可能原因：LPS的浓度不够准确或者不稳定：LPS是一种脂多糖，其浓度的准确性和稳定性对于细胞活力的诱导至关重要。您可以尝试使用精密天平称量LPS粉末来确保准确的浓度，并将其储存在低温下避免降解。溶解LPS的方法不适当：LPS的溶解需要在无菌条件下进行，并且可能需要使用一些特殊的技巧来确保完全溶解。

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问有没有路过的前辈友友们可以帮忙看看流式细胞仪测细胞线粒体膜电位这么画门可以吗？

是TTT

你需要设置阴性对照组，根据对照组的参数，和实验组就分成两群细胞了，你这里没太分开。这样做了，门的位置也就固定了，然后你调节补偿，让门在细胞群外面，不要压线。

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问跪求CGM-1细胞培养的protocol，细胞养死了，呜呜😭

z流沙z

细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。弃去培养上清，PBS 润洗细胞 1-2 次，加入胰酶置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，至拍拍培养皿侧壁后细胞大部分变圆并脱落即可，加培养基终止消化，1000RPM离心 5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀铺板。

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问MA104培养

z流沙z

一般来说，细胞出现空泡，代表细胞衰老或者状态不佳，很有可能是因为胰酶消化过久。其实从图一看细胞状态还可以，注意控制一下胰酶消化时间，消化时间大概为拍拍培养皿侧壁细胞可以脱落即可，要控制消化密度，不宜每天或者隔天消化，可以传少一点或者将多余的细胞弃掉。另外，消化铺板数小时后即可观察一下细胞，此时细胞差不多贴壁了，如果有较多细胞碎片等，可以用pbs洗两遍，重新添加培养基。

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问关于干细胞成骨分化诱导染色

z流沙z

染色是成功了，不过建议控制一下细胞密度，还要晃匀细胞，使其均匀铺在培养皿中，这样细胞不会堆积在一起，染色更好看。

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问肿瘤细胞膜提取。

土井挞克树

可以参考中科院的纳米材料辅助肿瘤细胞膜的提取方式。

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问Raw264.7 巨噬细胞培养和传代

龙大人驾到

减少极化现象可以从以下方面考虑：1. 传代时尽量避免过度吹打，以避免造成机械应力引起的异常活化和极化。2. 将培养基中的M-CSF浓度控制在适宜范围内，不过度刺激细胞。同时，在培养基中加入一些抗极化因子，如IL-4、IL-10等，有助于减少极化现象。3. 使用适宜的细胞培养条件，如适宜的pH值、温度、氧气浓度等，保证细胞在较为稳定的状态下生长。4. 在培养过程中尽量保证培养器内的通气性和清洁度，避

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问HUVEC细胞为什么消化不成单细胞？消化时细胞间有细丝相连？

是TTT

你消化时间太长了，这个细胞消化30-60s就行了，均匀滴加胰酶以后稍微摇匀，等半分钟左右晃动敲打，看到细胞掉下来了以后，马上终止消化。正常应该这样，消化要快一点。

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问HE染色模糊不清，在显微镜下观察这样是什么原因呢？

秋秋欣欣

细胞都看不太清楚，是不是脱腊没脱好

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问H&E染色的图片该怎么看？

sswei

细胞损伤分为可逆性改变与不可逆性改变两类。1、可逆性改变包括：细胞水肿、脂肪变、玻璃样变、黏液样变、病理性色素沉着；2、不可逆性改变即坏死，其基本病变为：核固缩、核碎裂、核溶解。据此，该图不能完全判断为细胞损伤，理解错误。

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