实验问答22,830,045 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问用尿酸钠在NRK52E细胞上造模，但不稳定，有没有有经验的老师同学能分析一下问题所在

z流沙z

试剂配好后分装保存，如果近期频繁使用，暂放4°，避免反复冻融

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问请问肿瘤细胞实验设计时间点一般都是24、48、72小时吗？可以设计成24、36、48小时吗？

sswei

在有利于细胞指数生长的培养条件下，哺乳动物细胞展示出一个复杂的生长和分裂周期，即细胞周期。在细胞有丝分裂和胞质分裂形成子代细胞之后的几个小时内才开始DNA复制（12-15h）。这个子代细胞形成与DNA开始复制的间隙被命名为细胞周期的G1期。G1期后的DNA合成通常需要6-8小时，这一DNA合成期被称为S期，经过S期后，细胞被认为应该直接进入有丝分裂期（M期）。然而，大多数哺乳动物细胞在进入M期之前

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问β半乳糖苷酶的组织冰切染色染不上，是什么原因？

sswei

染色时间不够，还有固定不好的话，也是不容易上色的。

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问乳腺癌细胞支原体怎么pcr检测呀？求详细试验方法

土井挞克树

为了准确判断细胞是否有支原体的污染，待测的细胞培养液样品需要取自换液后培养2-3天且汇合度在90%左右的细胞培养液上清（贴壁细胞）。悬浮培养的细胞也需要在换液传代后，让细胞生长2-3天再取培养液进行检测

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问请问一下，1个月前冻在-20的细胞沉淀(没有加RNA提取液)还能用来提RNA吗？

z流沙z

应该还行，以后可以加完trizol后再冻-80效果好一点

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问生存分析中，一组数据的标准误±SE>10%,还可以继续用K-M曲线进行组间比较吗？

loveliufudan

生存分析中的标准误（SE）是衡量估计值（例如Kaplan-Meier生存曲线的估计值）的不确定性的一种方法。SE值越小，表明估计值越可靠。SE值大于10%可能意味着估计值的不确定性较高，但并不一定意味着无法继续使用Kaplan-Meier曲线进行比较。需要根据具体情况来判断。对于您的数据，下肢组只有20个样本，而上肢组有120个样本，这意味着您的下肢组的样本容量相对较小。在这种情况下，即使SE值大

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问细胞培养

土井挞克树

胎儿生长受限受多方面因素调控，可能是孕激素，细胞通常采用胚胎细胞研究

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问求助｜大鼠胰腺星状细胞分离提取

土井挞克树

可以增加消化酶的浓度或者延长消化时间

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问原代细胞提取

sswei

存在可能原因:1、细胞的传代最重要的是胰酶处理时间：消化不够细胞本身就是成团的；若胰酶处理太久，容易造成细胞膜蛋白损伤，使细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。2、缺少贴壁因子：血清中含有促贴壁因子，而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子，细胞的贴壁效果会下降很多。3、支原体或细菌的污染。4、培养液配置、储存不当，如pH值过碱，Gln量太少等原因。5、复苏的细胞本

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问时空组学：比起组织显微切割细胞进行空间检测，GeoMx DSP 有什么优势吗？

sswei

DSP技术最大的特色在其“靶向性”，它可以靶向研究组织切片目标区域基因/蛋白表达特征，预先缩小了研究范围，极大提高了研究效率。这一点主要依赖于DSP与多重免疫荧光技术的融合，通过对切片的多重免疫荧光染色，预先了解切片的形态学特征，用户可以根据自己的研究目的针对性圈选目标区域进行测序分析，直接获取目标信息，有效规避了全切片无差别检测所带来的数据挖掘的压力，这一点也是DSP与10X Visium空间转

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问时空组学中数字化空间蛋白质组检测时，对于标本要求是什么啊？要不要提前加入什么抗体啊？

sswei

样品准备的基本原则1、代表性和一致性原则，2、迅速性原则，3、低温原则。

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问若要反映细胞增殖能力和活力是否可以只绘制生长曲线而不计算克隆生成率

z流沙z

可以，生长曲线反应细胞增殖能力，克隆形成主要反应细胞成瘤能力

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问测定药物对细胞增殖抑制的实验

z流沙z

可以只做其中一个，文献中使用多种方法做实验主要是为了多方面证明，另外一个是体现工作量

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问平滑肌细胞如何激活ras通路，浓度是多少

loveliufudan

平滑肌细胞可以通过多种途径激活Ras通路，其中常见的途径包括：G蛋白偶联受体（GPCR）激活：平滑肌细胞表面的GPCR可以被激活，从而促进Ras通路的激活。例如，肾上腺素和去甲肾上腺素通过作用于平滑肌细胞表面的β-肾上腺素能受体（β-AR），从而激活Ras通路。酪氨酸激酶激活：酪氨酸激酶可以被激活，从而促进Ras通路的激活。例如，一些生长因子（如表皮生长因子，EGF）可以通过结合平滑肌细胞表面的受

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问想构建某疾病的角膜上皮细胞模型，本打算用该病病人的血清培养角膜上皮细胞，可想到角膜是无血液的组织，那这种方法还可行吗？

sswei

培养方法:原代培养 1. 将供体角膜放于消毒过的物品上，上皮面朝上，用手术刀切成 12 个三角形组织片。应一刀切下去，避免锯割。如此仔细处理角膜可减少对胶原蛋白基质的破坏和成纤维细胞的脱落。2. 将角膜组组织片的上皮面翻向下，放入用鼠尾 I 型胶原蛋白预涂的 6 孔培养板，每孔放 4 个组织块。3. 用镊子轻压组织片，以便使组织块与培养皿表面充分接触。将组织片放置 20 min，使其变干。4. 将

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问LDH检测细胞活力，两次检测的OD值结果差别大

z流沙z

可能是计数不够精准导致铺板的细胞量不一样，也有可能是细胞活力的差别

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问小鼠胰腺癌细胞panc02有没有同学养过呀，有没有低密度时候的照片呢为什么不同厂家推荐的培养基不同呢？

z流沙z

可以去ATCC上面查询，有细胞照片和培养基等信息

3 回答229 围观

问叶酸的性质是有多不稳定哇？有没有前辈给点建议。

dxy_a18nvxdq

注意大环境的影响，光和实验室里的环境

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问如何绘制果蝇胚胎发育的时空图谱，研究果蝇身体分节是如何确定的，以及分节过程中参与的基因开关和梯度信号是什么？

sswei

形态发生素调节首先表达的合子基因（缺口基因）。缺口基因表达区呈带状，带宽约3体节，不同缺口基因表达区之间有部分重叠，他翻译的蛋白质以及浓度效应调控成对控制基因的表达。成对控制基因的带状表达区将胚胎沿前后轴分成周期性单位。它翻译的蛋白质激活体节极性基因转录。体节极性基因表达产物进一步将胚胎分成14体节。同时，缺口基因和成对控制基因的编码蛋白质，以及体节极性基因与同源异型框基因之间的相互作用，调节同源

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问样本量计算

土井挞克树

打开spss在左侧界面中依次选择“Procedures (程序)”—“Regression (回归)”—“Multiple Regression (多重回归)”—“Multiple Regression using Effect Size (使用效应大小的多重回归)”在“Design (设置)”模块中按以下参数设置相应选项Solve For：“Sample Size”表示本分析的目的是用于计算样本

3 回答585 围观

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