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        原代细胞提取

        相关实验:🔥 原代细胞培养实验

        user-title

        优秀的王小胖

        求大佬帮忙分析一下

        我提的小鼠子宫内膜基质细胞按文献说提完30min开始贴壁 24h换液 我等了24h感觉也没有贴壁 呜呜呜 怎么不

        细胞一直圆圆的 贴壁之后也是圆圆的 不伸展

        用的是DMEM-F12 加10%胎牛血清加1%的双抗

        有一次贴壁伸展了 但是细胞状态不好

        有无大佬帮我解答一下

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        3 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        存在可能原因:

        1、细胞的传代最重要的是胰酶处理时间:消化不够细胞本身就是成团的;若胰酶处理太久,容易造成细胞膜蛋白损伤,使细胞贴壁不紧,显微镜下观察立体感不强,严重的时候甚至会造成细胞死亡。

        2、缺少贴壁因子:血清中含有促贴壁因子,而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子,细胞的贴壁效果会下降很多。

        3、支原体或细菌的污染。

        4、培养液配置、储存不当,如pH值过碱,Gln量太少等原因。

        5、复苏的细胞本身状态不好,已经老化,失去贴附性。

        6、接种细胞数目太少,无法分泌足够的细胞外基质。

        7、复苏时处理速度太慢,复苏过程不当。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可能是细胞的密度太低了,可以把细胞密度提高试一下

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能是由于以下原因:

        细胞密度不够:如果您的细胞密度过低,则它们可能不会附着到培养皿上并开始生长。您可以尝试在培养皿上使用更高密度的细胞进行培养,或者使用细胞贴壁前的显微镜检查细胞的数量。

        培养条件不合适:如果您的细胞处于不适宜的培养条件下,则它们可能不会贴附并生长。请确保您的培养基含有足够的营养物质、pH值和温度,以支持细胞生长。此外,您还需要定期更换培养基以去除废弃物和添加新的营养物质。

        培养皿不适合细胞:有些细胞对于培养皿的材质和涂层有选择性。您可以尝试使用其他类型的培养皿,或者改变涂层的成分或浓度以促进细胞贴壁。

        细胞质量问题:如果您的细胞已经过度老化、受损或污染,则它们可能无法正常贴附和生长。在提取和分离过程中,确保使用高质量的试剂和设备,并在细胞贴壁前进行细胞的活力测试和品质检查。

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