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科研学霸天团，48小时有问必答

问求助 | OCT包埋小鼠骨骼肌

balalaLy

脱水的目的是防止冻的时候细胞被水形成的冰晶损坏，你这个冻过了，可能重新再脱水意义不大

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问求助：鱼类组织细胞污染类型

loveliufudan

可能是真菌污染，也可能是支原体或黑胶虫污染。可以根据不同类型的污染采用不同的处理方法，如添加抗生素、抑制剂、清洗处理、消杀丢弃等。

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问牙周膜干细胞成骨诱导10天死了…

土井挞克树

可以诱导的密度再大一点然后再加成骨诱导液。

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问请问脾细胞用贴壁培养板（treated）培养，淋巴细胞是贴壁，沉底，还是悬浮呀

土井挞克树

一般来说淋巴细胞是贴壁的，如果密度过大可能会沉底。

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问细胞污染求助

balalaLy

这些应该就是状态不好变圆肿胀然后死掉的细胞

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问被盛有完全弗式佐剂的注射器扎出血了有影响吗？需要做什么处理

小白在行动

我朋友（女，已婚，35）被扎了，简单挤了一下，没做别的处理。被扎部分一直轻微疼痛，两周后手指碰到粘合剂（某种胶），逐渐出点掉皮，瘙痒，红肿，疼痛现象。看过外科和皮肤科，只给了药膏涂抹处理，只能缓解疼痛，现在一个月了，还没好。请问各位老师有好的处理方式么，或者挂哪个科室较合适。

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问请问这种细胞是什么情况，属于污染吗？

土井挞克树

看着像是胰酶消化过度，建议减少消化时间。

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问transwell实验中上下室的不加血请和加血请的培养基的比例对实验的影响大吗

小刘小刘世界一流FVJ4

是有一定影响的，可能会使细胞迁移减少，但是我有次做实验弄错了，上下室都是加的10%的血清，最后也能看到不少细胞迁移。可能是不需要血清的趋化作用细胞本身就有穿过小室的能力

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问L请问Hela细胞这是黑胶虫吗。

小刘小刘世界一流FVJ4

黑胶虫这个概念其实是没有官方认证的，脏的可能是某种耐药细菌或者支原体或者衣原体。一般遇到这种问题我会直接把细胞扔掉，因为我曾经尝试过很多挽救方式，比如pbs清洗多次，每天更换新鲜培养基等，最后却越长越多，如果能和细胞共存还好，可是有些长多了就会导致细胞破裂，最后整个培养基都是混浊的，如果你的没长很多而且细胞状态还好，那就赶紧做实验吧。此外，如果细胞珍贵不舍得扔，还可以试试黑胶虫清除试剂或者支原体清

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问脓毒血症细胞模型怎么建立

dxy_37qs094

动物适应性饲养1周,实验前禁食12h。按50mg/kg体重的剂量经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后,将动物仰卧固定于手术板上,腹部手术区常规消毒与去毛,无菌条件下用手术刀在腹壁作一长约2cm切口,经切口进腹在回盲瓣远端分离并以3号丝线结扎盲肠,用18号注射针头于结扎端穿孔2次,并挤出粪便少许,然后用4号丝线间断缝合腹膜及皮肤,同时立即皮下注射生理盐水50ml/kg体重抗休克。

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问4T1细胞，传代后如图，活细胞长得快，但总有不贴壁，容易黏在一起生长，很难消化

loveliufudan

可以尝试以下建议：确保细胞在培养条件下正常生长：检查培养基、CO2水平、温度、湿度等因素是否正确。遵循正确的传代方法：确保每次传代前细胞密度不要过高，每次传代时要及时分离细胞，避免细胞黏连。检查细胞质量：使用显微镜观察细胞形态和活性，检查是否存在感染、突变或其他细胞质量问题。优化细胞培养条件：尝试不同的培养条件和培养基，如添加血清、生长因子等，以优化细胞生长。

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问CD206免疫荧光染色区分M0和M2效果不好

loveliufudan

要区分MO和M2，通常需要同时使用其他标记物，如CD86、CD163和CD209等，以形成多参数分析。MO和M2巨噬细胞具有不同的细胞表面标记物表达模式，因此可以通过比较多种标记物的表达水平来区分它们。例如，M2巨噬细胞通常表达CD163、CD206和CD209，而MO巨噬细胞则更常表达CD86和CD68。另外，为了确保实验的准确性，需要使用良好的实验技术和适当的对照，以排除非特异性标记或非特异性

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问求问大鼠的TNC怎么取，万分感谢

土井挞克树

选取的健康小鼠取血清、血浆、或组织匀浆然后使用elisa的方法进行提取

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问骨髓抑制模型

z流沙z

参考文献，然后设置几个不同梯度，摸索合适剂量

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问putback细胞系

loveliufudan

Putback细胞系（Putback cell line）是指经过基因编辑或转染后，使其再次表达原先被敲除或沉默的基因的细胞系。这些细胞系可用于研究该基因在细胞生物学、生物化学或病理生理学等方面的功能。通过将目标基因重新表达到其正常水平，可以更好地评估该基因在细胞过程中的作用，从而更深入地了解其生物学机制。Putback细胞系也常用于研究基因失活引起的疾病模型，并可用于开发新的治疗策略。

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问求助，细胞污染？

dengjun007

细胞碎片可能是细胞的分泌物或者是其他的物质，需要明确一下该物质的性质和如何处理这个物质而不使这个细胞变质。

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问用尿酸钠在NRK52E细胞上造模，但不稳定，有没有有经验的老师同学能分析一下问题所在

z流沙z

试剂配好后分装保存，如果近期频繁使用，暂放4°，避免反复冻融

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问请问肿瘤细胞实验设计时间点一般都是24、48、72小时吗？可以设计成24、36、48小时吗？

sswei

在有利于细胞指数生长的培养条件下，哺乳动物细胞展示出一个复杂的生长和分裂周期，即细胞周期。在细胞有丝分裂和胞质分裂形成子代细胞之后的几个小时内才开始DNA复制（12-15h）。这个子代细胞形成与DNA开始复制的间隙被命名为细胞周期的G1期。G1期后的DNA合成通常需要6-8小时，这一DNA合成期被称为S期，经过S期后，细胞被认为应该直接进入有丝分裂期（M期）。然而，大多数哺乳动物细胞在进入M期之前

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问β半乳糖苷酶的组织冰切染色染不上，是什么原因？

sswei

染色时间不够，还有固定不好的话，也是不容易上色的。

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问乳腺癌细胞支原体怎么pcr检测呀？求详细试验方法

土井挞克树

为了准确判断细胞是否有支原体的污染，待测的细胞培养液样品需要取自换液后培养2-3天且汇合度在90%左右的细胞培养液上清（贴壁细胞）。悬浮培养的细胞也需要在换液传代后，让细胞生长2-3天再取培养液进行检测

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