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        脓毒血症细胞模型怎么建立

        相关实验:🔥 原代细胞培养实验

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        落叶悲风


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        3 个回答

        user-title

        dxy_37qs094

        有帮助

        动物适应性饲养1周,实验前禁食12h。按50mg/kg体重的剂量经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后,将动物仰卧固定于手术板上,腹部手术区常规消毒与去毛,无菌条件下用手术刀在腹壁作一长约2cm切口,经切口进腹在回盲瓣远端分离并以3号丝线结扎盲肠,用18号注射针头于结扎端穿孔2次,并挤出粪便少许,然后用4号丝线间断缝合腹膜及皮肤,同时立即皮下注射生理盐水50ml/kg体重抗休克。

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        loveliufudan

        有帮助

        在建立脓毒血症细胞模型时,可以采用以下步骤:

        1.选择细胞系:选择适合研究脓毒症的细胞系,例如单核细胞系(如THP-1、U937)、树突状细胞系(如DC2.4)或淋巴细胞系(如Jurkat、Raji)等。其中,THP-1细胞是建立脓毒症细胞模型最常用的细胞系之一。

        2.刺激细胞:将细胞刺激以模拟感染状态,可以使用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等病原菌或它们的成分如LPS(脂多糖)刺激细胞。刺激时间和刺激剂量需要进行优化和控制,以模拟不同程度的感染状态。

        3.检测生理指标:在模拟感染状态后,检测细胞中的生理指标,如细胞存活率、细胞因子分泌、凋亡率、ROS(活性氧)水平等,以评估细胞模型的有效性和稳定性。

        4.检测分子机制:通过Western blot、Real-time PCR等技术检测相关分子机制,如NF-κB信号通路、TLR(Toll-like receptor)信号通路等的激活和参与情况,以深入研究脓毒症的分子机制。

        需要注意的是,脓毒血症细胞模型只能模拟感染状态下的生理和分子机制,不能完全代替动物模型。因此,在使用脓毒血症细胞模型研究脓毒症时,需要综合考虑动物模型和细胞模型的结果,以更好地理解脓毒症的发生机制。

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        土井挞克树

        有帮助
        1. 称量大鼠,腹腔注射水合氯醛(350mg/kg)麻醉,腹部正中剃毛后用碘酒及酒精擦拭手术区域。
        2. 沿腹白线切开腹腔约2cm,找出盲肠,用 5-0 缝线结扎约1/3盲肠,以21G针头贯通穿刺结扎的盲肠2次。轻轻挤压使少量肠内容物从穿刺孔溢出确保通畅;将处理好的盲肠回纳入腹腔,用 5-0 缝线缝合内层,3-0缝线缝合外层,将大鼠置于加热垫维持肛温在37±0.5℃。
        3. 待大鼠苏醒后自由饮水,正常饲养。
        4. 2d后大鼠水合氯醛钠麻醉后,于腹主动脉取血5ml,室温静止2h, 4℃离心机3000r/min离心10min,分离出上层血清,置-80℃冰箱保存备用。处死大鼠,取出心脏、肝脏、肾脏、肺、小肠,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋切片(厚4um),HE染色,观察病理改变,其余组织置于-80℃冰箱备用。
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