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科研学霸天团，48小时有问必答

问请问一下mkn45这个细胞传代胰酶消化多久合适啊

loveliufudan

一般来说，使用0.05%-0.25%的胰酶在37°C下消化细胞5-15分钟，可以将细胞完全分离。不过，实际消化时间和胰酶浓度需要根据实验者的经验和细胞状态进行调整。

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问脂肪细胞诱导分化时IBMX和地塞米松的浓度可以改变吗？有没有大佬做诱导分化效果比较好，分化速度适中的配方，求求

土井挞克树

首先让细胞长满以后，接触抑制2天(是细胞退出生长周期)，加入含有IBMX(一般使用浓度0.5mmol/L)，DEX(地塞米松，一般使用浓度是 1umol/L)和insulin(胰岛素，一般使用浓度1-10ug/ml)的培基2天，再换成只含胰岛素的培基2天，然后每两天换液(普通培基)。这是分化的步骤，但是最关键的是细胞的传代次数，细胞传代次数较多，分化率很低。一般说不能超过20代，最好在10代以内

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问细胞转染过后变的难消化

认真搞科研的小王

1.使用低黏附性的培养器皿进行细胞培养，如无血清的蛋白质涂层培养瓶、聚乙烯醇（PVA）涂层培养瓶等，以减少细胞与表面的黏附力。2.调整胰酶的浓度和消化时间，对于不同类型的CHO细胞和转染后的鼠源病毒，需要进行优化试验，找到最佳的消化条件。3.使用特殊的细胞剥离缓冲液或者酵素替代品进行细胞剥离，例如使用EDTA、TrypLE等。4.细胞密度不宜过高，需要及时调整细胞密度和培养容器尺寸，以保证细胞生长

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问江湖救急！谁能写一下，超详细的DF-1细胞培养过程啊？？

loveliufudan

1.准备工具和试剂DF-1细胞贴壁细胞培养瓶完全培养基：DMEM（高糖）培养基，含10%胎牛血清（FBS），1%青霉素-链霉素溶液DPBS（不含钙、镁）细胞刮刀离心机和离心管显微镜无菌操作台2.培养前的准备将培养瓶和培养基从冰箱和冰柜中取出，分别放入37℃恒温箱中和室温下复温。配制好的完全培养基在37℃恒温箱中加热30-60分钟，使培养基达到37℃。3.细胞传代将离壁的细胞吸入离心管中，然后离心5

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问细胞培养（脂肪细胞）问题求助？

Luckybabygirl

说明长得很好，但也要注意一下器材，比如细胞培养，你有没有什么问题或者有没有漏液等问题，如果都没有的话，勤换液就可以了

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问3T3-l1做诱导分化，到后面细胞飘得就越来越多，试了换小枪头轻柔的加，还是会飘得比较多，请问各位还有没有其他什么办法可以让细胞那么厉害

loveliufudan

以下是一些建议，可以尽量减少细胞飘动问题：细胞密度：确保在开始诱导分化之前，细胞密度达到适当的水平。一般来说，3T3-L1细胞在形成完整的单层且过密度的情况下（称为“过度传代”）才能有效地分化为脂肪细胞。当细胞密度过低时，细胞间的相互作用会减弱，导致细胞更容易脱落。诱导分化时培养液的更换：在分化过程中，尽量减少或避免不必要的培养液更换。在更换培养液时，轻柔地沿着培养瓶壁斜向加液，避免直接将培养液吹

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问细胞复苏3天后出现这种黄色斑块的是污染吗？培养基不混浊，但感觉细胞生长比较缓慢，不确定这是不是污染

汤姆卜丽波

像是霉菌，细胞状态也不太好，你试着下次复苏加一点三抗

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问染色体制片效果和实验室温湿度等环境因素的关系？

loveliufudan

环境因素确实可能影响到细胞制片过程中的质量。温度、湿度和环境稳定性在染色体制片过程中起着重要作用。以下是一些建议，以帮助您改善制片质量和避免外界因素的影响：控制实验室环境：在进行染色体制片实验时，尽量保持实验室温度和湿度相对稳定。如果可能，为实验室安装空调和加湿器以保持恒定的温度和湿度。在恶劣天气条件下（如高湿度），尽量避免进行实验。标准化固定液浓度：在制片过程中，确保使用适当浓度的固定液。过高或

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问小鼠细胞培养过程中，换培养瓶后，发现培养瓶底部有模糊的黄褐色絮状物，这是什么原因造成的？

土井挞克树

黄褐色絮状物可能是细胞培养底部缺氧造成的细胞无氧代谢产物，建议及时给细胞换液清除黄褐色沉淀。

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问MDA-MB-453,BT474,SKBR-3，JIMT-1 细胞周期分别怎么样啊，多久传一次代，几天换一次液呀？

汤姆卜丽波

这几个我们课题组有人在养，一般都是两天传代，一传二，换液就是什么时候培养基黄了就换

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问神经原代细胞凋亡检测都有信号，为什么没有特异性？

晴空a

因为神经细胞的凋亡时有基因的选择性，所以无特异性。

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问细胞培养问题求助？？

AnythingGoes

大概率是黑胶虫污染，看培养基是否浑浊，如果浑浊可能是细菌污染

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问水凝胶用于细胞培养时一定要冻干吗？

土井挞克树

固化的水凝胶也可以用于细胞培养。

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问基因过表达成功但细胞迁移或增殖就是没趋势是否可以判定该基因不具有相应功能？

loveliufudan

仅仅通过基因过表达成功但细胞迁移或增殖没有趋势，不能完全判定该基因不具有相应功能。这可能是由于多种原因导致的，如实验条件、细胞类型、转染方法、检测方法等等。首先，建议检查实验条件是否一致，例如培养基是否相同，细胞密度是否一致，细胞处理时间是否相同等等，这些因素对实验结果会有很大的影响。其次，细胞类型可能对实验结果有较大的影响。不同细胞类型在迁移和增殖的能力上存在很大的差异，因此可能需要在不同的细胞

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问大鼠CD4+ T细胞分离和培养问题求助？

sswei

可以选用磁珠分离CD4+T细胞较好。体外培养基是用RPMI-1640

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问培养贴壁细胞发现培养基浑浊，细胞状态还可以，但是有小沙砾状的东西，是什么污染呢？？

BudPlum

首先培养基浑浊是因为污染，其次小沙粒状应该考虑细菌感染。

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问DSS蛋白寡聚化实验请教🥺

dxy_rwzqgvz0

我也出现了这种情况，再加点DMSO溶解以后，加loading buffer煮样吗

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问培养皿里面已经出现细胞团块了，是不是已经开始影响后续实验了？

z流沙z

看细胞状态如果还好的话，应该问题不大

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问复苏细胞数量过少，是继续培养？还是重新复苏？

偶然必然BMC5

细胞培养需要的时间不一样，条件相同，继续培养再试试！

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问请教个问题，如果培养箱里面有细胞污染，而且很多瓶污染，要不要清空，彻底消毒？

偶然必然BMC5

你这个问题原因很多，第一排除培养基污染及菌种的污染，三角瓶都有封口膜的，可以隔离大部分污染。第二再培养箱大消毒杀菌

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