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        江湖救急!谁能写一下,超详细的DF-1细胞培养过程啊??

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        dxy_fewru9n7

        越详细越好

        wx-share
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        2 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        1.准备工具和试剂

        DF-1细胞

        贴壁细胞培养瓶

        完全培养基:DMEM(高糖)培养基,含10%胎牛血清(FBS),1%青霉素-链霉素溶液

        DPBS(不含钙、镁)

        细胞刮刀

        离心机和离心管

        显微镜

        无菌操作台

        2.培养前的准备

        将培养瓶和培养基从冰箱和冰柜中取出,分别放入37℃恒温箱中和室温下复温。

        配制好的完全培养基在37℃恒温箱中加热30-60分钟,使培养基达到37℃。

        3.细胞传代

        将离壁的细胞吸入离心管中,然后离心5分钟,1500 rpm(约200-300g),收集细胞。

        轻轻弹击离心管,将细胞颗粒悬浮在上清液中,再弃去上清液。

        向离心管中加入1-2ml预热的完全培养基,轻轻吹打以使细胞充分悬浮均匀。

        计算细胞浓度并根据实验需要进行细胞分裂。通常,DF-1细胞可以以1:3至1:6的比例进行传代。

        将所需数量的细胞接种到新的贴壁细胞培养瓶中,并加入适量的完全培养基。

        将细胞培养瓶平放于37℃,5% CO2恒温培养箱中进行培养。

        4.细胞培养及维护

        每天观察细胞生长状况,如细胞形态、密度等。

        当细胞生长至约80-90%时进行下一次传代。根据细胞生长速度,通常需要2-3天进行一次传代。

        如果细胞生长缓慢或出现形态异常,请检查培养条件、培养基成分或者考虑细胞可能的污染情况。


        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        DF1培养过程如下:

        一.培养基及培养冻存条件准备:

          1) 准备DMEM培养基;优质胎牛血清,10%;双抗 1%

          2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

          3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

          二.细胞处理:

          1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养,补加培养基至6ml。

          2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

          1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

          2)加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

          3)轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,加1-2mL培养液后吹匀。

          4)将细胞悬液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。

          3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为类;

          1)细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

          2)4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度1-2xE6/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。

          3)将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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