贴壁细胞mkn45消化用37度两分钟总是消化不下来，每次都要搞很久，细胞状态就不好了，该怎么办呢

可以在显微镜下观察，细胞变成圆形，就可以加培基终止消化，并且吹打下来了，这种方法比较科学

1.消化前将残留培养基洗净，防止残留培养基减弱胰酶的消化能力，

2.选择合适的胰酶浓度及消化时间，

3.消化几分钟大多数细胞变圆后可轻拍培养瓶(培养皿)，加速细胞脱落，

4.用移液枪吸取pbs吹洗培养瓶(培养皿)底面。

5.操作完成后将细胞胰酶pbs混合液尽快离心，去除胰酶

细胞消化时要将培养液去除，加PBS清洗去除血清, 残留血清会影响胰酶消化；其次胰酶浓度，一般细胞消化可用0.05%胰酶,，消化困难者用0.25%胰酶；胰酶不能反复冻融，必要的话可分装使用。还有可以消化2-3分钟后，加入培养基反复吹打使细胞脱落培养瓶。

延长细胞消化时间，以在镜下观察细胞变圆，轻拍培养皿侧壁细胞飘落下来为宜。甚至可以把胰酶放在培养皿中进行消化，然后加培养基终止消化后离心收集细胞。防止过度吹打造成的细胞机械系损伤。

MKN45细胞属于粘附性细胞，可能会比较难进行组织消化。以下是一些可能有用的技巧：

1. 确保消化酶的浓度和消化时间适宜。建议使用含有胰酶和EDTA的PBS缓冲液，在37度下加入适量的消化酶，建议消化时间为5-10分钟。

2. 在消化过程中轻轻摇动培养皿，以有利于细胞的分散和消化。

3. 可以尝试在消化前先用PBS或细胞培养基预处理细胞，使细胞离开培养皿底部，便于消化。

4. 如果细胞状态不好，可以尝试进行细胞的分离和纯化，以提高细胞的活力和质量。