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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
共聚焦小皿固定以后细胞用pbs洗容易飘,有没有好一点的解决办法,2细胞本身转染了带mcherry的慢病毒,两个靶蛋白共定位的话选
huarenqiang5
建议爬片或者共聚焦皿用多聚赖氨酸和层粘连蛋白进行预处理。
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问
.能不能通过荧光或者激光共聚焦判断目标蛋白在不在细胞膜上?
sswei
可采用毛细管电泳-共聚焦激光诱导荧光技术检测单细胞中目标膜蛋白的检测方法。
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问
染核蛋白的时候荧光全在胞浆里,核蛋白染不出来,但是之前染的时候荧光是在胞核里的。请问这是什么原因,如何改进
skyye
Triton X-100通透的时间和浓度是多少呢?可以适当提高浓度和延长通透时间
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问
荧光淬灭太快(几秒钟就消失了还没来得及拍就全黑了)可能是什么原因呢?该怎么改进呢?
土井挞克树
可加防荧光淬灭剂,或者你速度快点以及在激光照的时候再拍照,不拍的时候移开玻片
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问
免疫荧光染色,两种抗原的共标率如何计算?
dxyc42u
可以使用流式细胞技术检测后上机分析
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问
红色细胞膜荧光探针,总是染完之后在镜下看一片红,并没有像DAPI标记细胞核一样,完整标记细胞膜,不知跟什么原因有关系,怎么能改进
dxyc42u
考虑红色细胞膜荧光探针特异性有关
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问
多颜色共同免疫荧光,最多选几个颜色,选哪些颜色的串色发生少?免疫荧光,或者激光共聚焦哪个好?
feixue7758527w
不知道最多选几个颜色,我所知道的实验大多就是两个染色的,最多也就是三个颜色,再多就不知道了。
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问
烟草叶片共侵染结束后,为什么CFP和RFP只有RFP有信号?
dxyc42u
很有可能是CFP还没表达,可以延长检测时间看看,
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问
组织成像时40倍物镜模糊,调整焦距不能解决,细胞40倍物镜就很清楚,什么原因?同一张片子,20倍物镜可以清晰,10倍物镜就茫茫一
feixue7758527w
我觉得还是你的片子切的太厚了,放大倍数越大,要求组织切片越薄,否则就是看不清的。
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问
偶联的兔源二抗单染在GFP通道下会有黄色荧光是为什么?在荧光双染时,如何避免或设计对照以排除荧光二抗串色带来的假阳性
dxyc42u
买牌子好一点的抗体就能避免这种情况
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问
荧光染色拍照时 BW模式与伪彩或RGB模式该如何选择?
dxyc42u
我们一般选择BW模式拍的就很清楚了
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问
观察切片免疫荧光时,正置荧光显微镜与倒置荧光显微镜该如何选择?
烧伤科常医生
观察切片的时候正置和倒置的都可以,观察细胞培养皿的时候一般用倒置的
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问
细胞器荧光成像很糊,调整聚焦参数无法改善,可能原因是什么?
huarenqiang5
考虑可能是焦距不对或抗原本身的原因。
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问
如何很好地去染膜蛋白的免疫荧光?怎么保证染到的只是膜蛋白?
huarenqiang5
在洗涤过程中,一要注意动作轻柔,固定后的细胞比较脆弱,如果太过大力,很容易把细胞吹洗掉,二是洗涤时间要把握好,每次洗涤5min左右,三是切忌不要干片,即吸掉溶液后不要把细胞干着,不然容易造成背景着色。
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问
调了很多参数,但组织的自发荧光仍然明显
dxyc42u
确定减少自发荧光的技术方法FFPE组织中产生的自发荧光很可能是由于C = C键或C = N键的存在。为了解决这一问题,有些研究,利用硼氢化钠来还原C = C和C = N键以减少组织的自发荧光。然而,硼氢化物和与之类似的还原剂在中性pH环境下很不稳定。研究人员发现,尽管硼氢化钠可成功的减少组织中的一些自发荧光,但该方法的可重现性低、试剂处理难度很大。
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问
SIM成像时 1、荧光淬灭太快如何减少荧光淬灭,2、活细胞成像时SIM图像背景荧光太高如何调整。3、SIM成像如何调整曝光时间与
huarenqiang5
1.保持避光。2.减少曝光时间减弱光源强度。3.降低样品浓度。
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问
共聚焦模式适合什么情况?共聚焦模式下,荧光信号非常弱,怎么调整?信噪比调节?共定位怎么看?荧光强度量化与拍照设置关系?
dxyc42u
荧光信号比较弱的话看看是不是汞灯使用寿命到了
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问
293t活细胞成像 hoechst染核最适浓度与时间是多少?染核后细胞贴壁不牢换液漂浮怎么办?
huarenqiang5
最合适浓度为 10 ug/ml ,时间建议在5 分钟。
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问
当其中一个荧光信号很弱时,应该如何调整参数而不导致实验结果出现假阳性?
balalaLy
可以先拍实验组,然后再用同样的参数拍阴性对照组
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问
请问药物浓度增大之后荧光信号整体向右上方漂移是为啥呀
sswei
流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。流通池被污染或有气体。
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