荧光淬灭太快（几秒钟就消失了还没来得及拍就全黑了）可能是什么原因呢？该怎么改进呢？

可加防荧光淬灭剂，或者你速度快点以及在激光照的时候再拍照，不拍的时候移开玻片

1.抗原浓度太高,荧光信号过强,快速淬灭。如果上样量太大,不仅条带会粘连、弯曲,更可能导致淬灭。因为局部区域过多的HRP酶会快速消耗底物呈富氧态,条带出现烧灼样(取出膜会发现一条明显的暗黄色的带),荧光信号会闪灭或者条带空心(条带灰黑不实,则可能是显影液接近失效)。

2.抗原浓度太低,荧光信号太弱,相对慢一点的淬灭。可能第一次压片能够获得很弱的条带,随后都不可见。

荧光淬灭，又称光漂白，主要是光诱导的荧光素降解，导致信号随时间流逝而变暗；可从以下几方面入手改进：1. 选择更稳定的荧光染料，如Alexa Fluor系列；2. 使用抗淬灭剂（免疫荧光可采用Prolong或Slowfade抗淬灭封片剂，活细胞成像可采用Prolong Live抗淬灭剂）; 3. 成像时，调整硬件参数，减少光强、减少曝光时间等。