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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
培养的细胞为什么总是一言不合就抱团,吹打之后也还是会这样?有什么很好的办法解决这一问题吗
丁香清香
引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差,且在吹打细胞的时候,那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损,所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性,让细胞保持较好的生长状态。
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问
ana-1细胞污染,培养液浑浊变黄,求助挽救办法
雲深何跡
大概率挽救不了了,建议更换新的试剂和耗材
5 回答
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问
悬浮细胞培养状态很差,细胞成团,细胞上有很多毛毛点点的东西,有什么办法可以挽救吗
bamboopiggy
血清不好,毛毛的东西是细胞碎片,换好血清,离心换液
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问
细胞培养过程中碰到的小黑点,到底是什么啊,一直都有
丁香清香
在细胞培养中常可见到细胞及培养液中有一些大小不等、形态不同的黑色未知颗粒。有可能是细胞碎片或者污染如:支原体、真菌和寄生虫等
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问
caski细胞培养很慢,有没有什么方法可以加快培养速度啊
bamboopiggy
可以更换好的血清,或半量换液,实在要扩,可以提高血清浓度到15-20%
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问
细胞荧光染色法显示结果这样了,跟之前的不一样了,怎么处理啊
天一湖医者
或者是因为你的细胞不纯,比如转染了你目的基因的表达质粒。
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问
GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?
bamboopiggy
glumax是glutamine的替代物。GlutaMAX™-I是一种二肽——L-丙氨酰-L-谷氨酰胺——在水溶液中更稳定,不会自发降解。一般如果细胞状态不好,或者是培养基中注明要额外添加glutamine,可以用glutamax
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问
各种细胞培养用的dish,flask是否均相同?
bamboopiggy
差不多吧,一般都是底面处理过的,就是有的品牌有假的,需要注意,假的底面处理的不匀
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问
细胞欲冷冻保存时, 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?
bamboopiggy
一般1x10^6每ml就可以,细胞浓度不宜太低,也不能太高
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问
培养细胞时应使用5% 或10% CO2?或根本没有影响?
Topmicro
细胞培养时常规使用5%的二氧化碳,模拟细胞在体内的氧气浓度,需要注意的是氧气浓度不同对细胞相关通路蛋白的表达是有影响的。
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问
HUAEC细胞和CD4+T细胞共培养培养基的问题
bamboopiggy
这个要看你的实验目的,如果要收HUAEC,就把它放下层,如果收cd4+T,就把cd4放下层。
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问
细胞培养时~大家一般提前多久预热?
dxy_g0ob0d88
提前拿出来30分钟足够了,我们有时候也会放室温
8 回答
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问
小胶质细胞好用的marker
天一湖医者
小胶质细胞常用好用的marker
3 回答
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问
想问下细胞突然变得不好消化了是什么原因
bamboopiggy
1.可能是你养的时间太长了,细胞一层叠一层,不是单层了,所以胰酶难消化。2,可能胰酶失效了。
3 回答
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问
293 细胞冻存一定要加血清吗?我们根据卖家提供的无血清培养基和冻存步骤进行冻存建库,总是复苏不起来,活不过两代就死翘翘了~
dxy_gwrp7ndq
冻存的细胞状态必须好且处于对数生长期,该用90%血清+10%DMSO,可能会取得好的效果;复苏的温度应在39-40度之间,复苏与冻存正好相反,应该速溶速化。
4 回答
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问
细胞样品抽提RNA的数量问题
Eason老歌迷
用Trizol来提取细胞总RNA的话,一个6孔板的细胞足够了。对于贴壁培养的细胞,可将培养基吸出后直接向培养板中加入Trizol来溶解细胞,然后分次移出细胞裂解物进行后续操作即可。值得注意的是,对于所加Trizol的量,是依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定用量的(一般每10cm2加1ml)。当Trizol量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。另外,在Trizol的使用说明中的注意事项提
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问
细胞传代后鉴定细胞的稳定
Eason老歌迷
一般情况下细胞生长至完全汇合后就应该传代,所有细胞生长都有一个要求不宜生长过密(也就是常说的长老了),但有接触抑制的细胞,在汇合前就必须进行传代,这类细胞一般在密度70-80%就进行传代,否则会引起细胞分化。可以5-10代做一次测序。
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问
细胞复苏传代后养变形了是怎么回事?
Topmicro
细胞复苏传代后变形很正常,像ht-29细胞传代之后可能会长成像上皮组织的形态。
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问
THP1细胞养久了容易抱团或者贴壁,然后还会有一些小黑点,应该怎么样培养?
异乡人hyq
细胞养不好,可能的原因有,THP-1细胞特别依赖细胞浓度,ATCC上10 5到106每ML,是一个很高的密度,细胞少了就不太容易养好。细胞株的来源很重要,如直接来源于ATCC(American Type Culture Collection 美国模式菌种保藏中心)生命力要强于国内细胞库的。注意细胞的密度一定要高,介于5×105—— 106/ML之间,增值的快。细胞数量太少,不适合THP-1生长,一
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问
怎样拯救污染了的细胞,培养过夜的细胞有黑色点。
bamboopiggy
如果能有替代,尽量扔掉,否则可是试试加各种你能弄到的抗生素,尤其是两性霉素B吧。
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385 围观
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