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科研学霸天团，48小时有问必答

问细胞培养时~大家一般提前多久预热？

dxy_g0ob0d88

提前拿出来30分钟足够了，我们有时候也会放室温

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问小胶质细胞好用的marker

天一湖医者

小胶质细胞常用好用的marker

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问想问下细胞突然变得不好消化了是什么原因

bamboopiggy

1.可能是你养的时间太长了，细胞一层叠一层，不是单层了，所以胰酶难消化。2，可能胰酶失效了。

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问293 细胞冻存一定要加血清吗？我们根据卖家提供的无血清培养基和冻存步骤进行冻存建库，总是复苏不起来，活不过两代就死翘翘了～

dxy_gwrp7ndq

冻存的细胞状态必须好且处于对数生长期，该用90%血清+10%DMSO，可能会取得好的效果；复苏的温度应在39-40度之间，复苏与冻存正好相反，应该速溶速化。

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问细胞样品抽提RNA的数量问题

Eason老歌迷

用Trizol来提取细胞总RNA的话，一个6孔板的细胞足够了。对于贴壁培养的细胞，可将培养基吸出后直接向培养板中加入Trizol来溶解细胞，然后分次移出细胞裂解物进行后续操作即可。值得注意的是，对于所加Trizol的量，是依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定用量的（一般每10cm2加1ml）。当Trizol量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。另外，在Trizol的使用说明中的注意事项提

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问细胞传代后鉴定细胞的稳定

Eason老歌迷

一般情况下细胞生长至完全汇合后就应该传代，所有细胞生长都有一个要求不宜生长过密(也就是常说的长老了)，但有接触抑制的细胞，在汇合前就必须进行传代，这类细胞一般在密度70-80%就进行传代，否则会引起细胞分化。可以5-10代做一次测序。

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问细胞复苏传代后养变形了是怎么回事？

Topmicro

细胞复苏传代后变形很正常，像ht-29细胞传代之后可能会长成像上皮组织的形态。

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问THP1细胞养久了容易抱团或者贴壁，然后还会有一些小黑点，应该怎么样培养？

异乡人hyq

细胞养不好，可能的原因有，THP-1细胞特别依赖细胞浓度，ATCC上10 5到106每ML，是一个很高的密度，细胞少了就不太容易养好。细胞株的来源很重要，如直接来源于ATCC（American Type Culture Collection 美国模式菌种保藏中心）生命力要强于国内细胞库的。注意细胞的密度一定要高，介于5×105—— 106/ML之间，增值的快。细胞数量太少，不适合THP-1生长，一

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问怎样拯救污染了的细胞，培养过夜的细胞有黑色点。

bamboopiggy

如果能有替代，尽量扔掉，否则可是试试加各种你能弄到的抗生素，尤其是两性霉素B吧。

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问细胞复苏之后，为什么聚团？

异乡人hyq

首先，常规的“抱团”是指贴壁细胞被消化后悬浮状态下的聚集情况。细胞在贴壁生长时，聚集在一起是正常现象。当周围细胞寥寥无几，而这一团已经叠层生长，这就是在悬浮状态就已经聚团的细胞再贴壁导致的。相同条件下，培养的癌细胞对密度依赖性的生长抑制敏感性降低，所以即使在形成单层后，也不会停止生长，而是相互堆积形成多层生长的聚集体。其次，部分细胞被污染后会出现细胞聚团，这和操作有很大关系，比如：传代铺板时，是

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问细胞爬片不均匀，有很多聚集

Eason老歌迷

可能是培养液加的太少。或者细胞接种后震荡的太厉害。

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问细胞冻存传代多久一次比较适合?

异乡人hyq

原代分离的细胞最好在3代以内，如果是无限传代细胞无所谓。

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问Elisa检测细胞培养上清内的细胞因子与血清中细胞因子的检测结果趋势不一致，是怎么回事？血清中细胞因子浓度有差异，上清中没有差异

Eason老歌迷

检测细胞因子的技术大致可分为3类：生物活性检测法、免疫学细胞因子直接定量法、分子杂交检测法。但因分子杂交检测法及生物活性检测法所要求的实验室条件较高，目前多数采用抗原检测的经典方法——ELISA法。ELISA虽操作简单，但一次只能检测一种细胞因子，需要抗原包被，样本需求量大，实验时间大于24小时，且有酶-底物的背景干扰，无法反映细胞因子之间的网络关系。他俩本来就有差别。

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问a549老化，触角多，如何改善?

bamboopiggy

a549是永生化的，不是老化，是你血清不好，所以才有触角

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问有方法可以确定细胞大概传了多少代吗？一般极限是多少

bamboopiggy

最好同一波实验，用相差不超过5代的细胞做。这样结果比较可靠

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问贴壁细胞，漂浮细胞特别多

bamboopiggy

多传几代，如果一直有悬浮细胞多，考虑减少胰酶消化时间，因为悬浮的都是死细胞

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问肺癌细胞生长缓慢怎么办

Topmicro

需要先肺癌细胞生长缓慢的原因，可能是菌株嗯原因，也可能是培养液和血清的原因，可以先更换血清试试。

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问怎么提取鼠心脏成纤维细胞

异乡人hyq

改良联合酶消化法可以稳定的提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞。

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问怎么分离到95%以上纯度的神经元细胞

dxy_btpk2zd7

建议参考https://baijiahao.baidu.com/s?id=1698279024646236112&wfr=spider&for=pc&searchword=%E5%88%86%E7%A6%BB%E5%88%B095%%E4%BB%A5%E4%B8%8A%E7%BA%AF%E5%BA%A6%E7%9A%84%E7%A5%9E%E7%BB%8F%E5%85%83

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问小细胞肺癌悬浮细胞养不起来

bamboopiggy

是不是半贴壁，但是不用胰酶消化，用枪一吹就起来了？这样也可以，不一定非要纯悬浮。

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