实验问答21,901,547 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问想问下各位大佬：M-CSF诱导小鼠骨髓来源的BMDM，诱导完成后，种板的细胞培养基中还需要给予M-CSF嘛？

bamboopiggy

这个不是加不加MCSF的问题，而是BMDM不可传代，不可用胰酶消化，建议直接铺板，进行诱导，诱导后直接进行实验，不易过长时间培养，会恢复原来的圆形形态。

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问猪肺原代肺巨噬细胞生长速度比较慢，贴壁效果不好怎么办

Eason老歌迷

细胞生长速度慢的解决办法:增加起始培养细胞浓度；换入新鲜配制培养液；补加生长因子；血清需要保存在5℃到20℃，培养液需在2-8℃避光保存；含血清培养液在2-8℃保存，并在2周内用完；要轻轻吹打消化细胞；分离培养物，检测支原体；比较新培养液与原培养液成分，让细胞逐渐适应新培养液。细胞不贴壁:细胞的传代最重要的是胰酶处理时间：消化不够细胞本身就是成团的；若胰酶处理太久，容易造成细胞膜蛋白损伤，使细胞贴

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问[求助]肠神经元原代培养

天一湖医者

可以参考下这个文献https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=738210c5983acc2c5f8741f441763fcc

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问Tunel凋亡和双染测凋亡有什么本质差别吗?

Eason老歌迷

双染法特异性高，简单易行。tunel灵敏度高，但是成本高。最好是配合着用

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问iPS细胞在复苏培养的过程中容易遇到的问题有哪些？

天一湖医者

培养细胞不贴壁？悬浮细胞成簇？原代细胞培养物污染？培养细胞死亡等问题。

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问请问肿瘤悬浮细胞，最近开始变形长伪足，换了培养基跟血清，我怀疑gibco血清是假的，有所好转，培养基血清会导致细胞这样么？为什么

Eason老歌迷

换了培养基和血清，有所好转，那说明还是和这两个因素有关……

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问最近好几次Western blot出来的结果不满意，怎么办呢？

丁冉1234

有可能是曝光液时间久了失效或是条带上沾了太多的曝光液

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问MTT测药物对细胞的毒性，测的OD值必须在0-0.7范围内吗？

未来9

一般合适的OD值是在0.1-0.7之间，一般大于1可能就不会不准了

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问收集鳟鱼胚胎提取物时，经过胚胎融化、过滤、离心厚，收集到的上清液，怎样稀释到理想蛋白质浓度？

我也是锦鲤ye

测量蛋白质浓度，用 LDF 将提取物稀释至理想的浓度。

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问PANC-1细胞为什么看上去长不满

半糖奇朵

可以调整下培养基血清的配比，或者查一下权威文献中该细胞系的培养方法

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问检测细胞凋亡时，PI染色法的染色剂制备过程是什么，与AO染色法相比有什么优点？

bamboopiggy

这两个方法都可以，看你们实验室有那种就用那种呗，一般用PI的多，是因为PI只能染死细胞，正常细胞不能着色吖啶橙(Acridine Orange，AO)为一种荧光染料，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm，吸收波长为515nm。它与细胞中DNA和RNA 结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光，红色荧光为AO-DNA(F>600nm),绿色荧光为A

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问我想请问一下怎么找到我做的抗体有几种亚型呢？

BelleK1EH

1.建议从研究相关文献资料中寻找抗体亚型相关资料2.也可以去相关厂家网站寻找

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问人来源正常肝实质细胞

bamboopiggy

Hepatocytes are freshly isolated and cryopreserved on the same day. All cryoplateable hepatocyte characterization information can be found by viewing the characterization tables at www.bioreclamationi

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问求助，如何判断细胞的对数生长期

天一湖医者

判断细胞是否处于对数生长期的方法：1. 细胞汇合度达到70%-80%时基本上是出于对数期，在显微镜下一观察就可以。 2. 做生长曲线一作图。3. 细胞计数，养上几个孔的细胞，每隔1-2天消化一个孔的细胞下来用台盼蓝染色血球计数板计数。4. 如果是简单的判断一下，要搞清楚细胞生长的不同时期，刚开始细胞生长一般是悬浮的，后来贴壁生长，直到生长到长满瓶底80%时间都是对数期。细胞的对数生长期：对数

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问细胞提取rna跑胶条带太暗，还有弥散条带怎么办

Eason老歌迷

扩增杂带?解决办法:退火温度提高，延伸时间缩短，混合样品时放冰上，尽量别对着样品说话，以免污染样品。

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问请问大神们，悬浮细胞，卵巢肿瘤的悬浮细胞，细胞以前偶尔会出现变形但很少，最近细胞变形很多，请问这种变形的原因是什么？怎样避免？

未来9

一般培养的悬浮细胞的确容易出现这个情况。1.从复苏细胞开始，要了解细胞的生长周期，尤其是出现指数生长期的时间段。尽量将细胞控制在一个合理的培养阶段，不要贪图省力贸然将细胞培养密度调小，或者认为过一个周末多个半天不处理也没有关系；除非你已经做过生长周期的确认；2.有些悬浮细胞在平面培养环境中，会贴服在培养表面，虽然不会像贴壁细胞一样，但也不容易飘起来，但是在不断传代中会出现贴壁越来越差的情况，这个时

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问羊水细胞培养时，如何判断收获细胞的最佳时机？血性羊水如何处理？

科拜余萌

羊水细胞普通培养法1．一切操作均在严格无菌条件下进行，抽取羊水20～30ml，立即送往实验室。2．将穿刺所得羊水离心（1500r/min）5分钟，而后在接种箱内吸出上清液留其他检查用，将剩下的0.5ml沉淀在管底的羊水细胞轻轻打匀，分别接种在两个盛有培养液的无菌培养瓶内，充分混匀，放入37℃5%CO2培养箱。3．培养液有市售羊水培养液、张氏培养液或自制的F10培养液，L-谷氨酰胺，加小牛血清双抗，

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问外周血淋巴细胞染色体实验中，分裂相极少的原因？

bamboopiggy

不是试剂的问题，就是淋巴细胞收集的问题，淋巴细胞的量要够

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问关于细胞传代培养的细胞问题？

墨尔本

如果有仪器和试剂的话其实用AOPI进行染色会更直观，死的是红色，活的是绿色。

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问请问悬浮细胞如何做transwell测细胞迁移能力，具体步骤？按照正常贴壁的做过几次，上室种2万了细胞，染色没有细胞。

bamboopiggy

悬浮细胞穿过膜后会直接掉入下室，移除上室，用倒置显微镜观察可直接计数，在高倍镜下随机选取5个视野进行计数，最后计算平均值。或者收集下室培养液，用流式细胞仪计数

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