提小鼠原代肺成纤维细胞三个月 一直是长着长着细胞就死了

您好，可以分享一下提小鼠原代肺成纤维细胞的protocol吗？

照理说成纤维细胞还是比较好养的，你换胎牛血清试试，并且原代细胞，你养三个月作什么？直接实验不好么？

你可以试试以下方法：

1. 配制0.25%的胰酶，-20度冻存，用时取出，37度水浴温浴。然后将其pH

值调至7.0左右，因为胰酶在碱性环境中，消化作用最强。

2. 取出细胞把原液倒出，用D-Hanks洗2/3次以去除残留的血清等抑制胰酶消

化的因素，加2-3ml经预热的0.25%的胰酶。轻轻晃动瓶子，使瓶中细胞都

能接触倒胰酶。倒置显微镜下观察，如果见到细胞变圆，间隙增大（时

间约为2分钟）时，倒掉胰酶，用D-Hanks洗2/3次（或直接加入含血清的

培养基以终止消化），加入2ml左右的含血清培养基，用吸管轻轻的吹打

瓶壁致使细胞成单个悬浮细胞（你可以镜下观察细胞消化程度。注意吹

打不 要太用力，也不要吹打时间过长，这样会使细胞破碎，死亡。）

3. 根据你原始细胞的致密程度和你的需要按1：2；1：3或1：4传代。然后

放置5％的CO2孵育箱中培养。平均2-3天换一次液。传够一定数量，进行

冻存。

4. 对于你所述的胰酶浓度和消化时间以及吹打时间，你需要考虑。

需要规范操作，避免污染；

改善培养基，使用比较好的培养基再试试