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科研学霸天团,48小时有问必答
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STC-1细胞传代后多久贴壁
天一湖医者
文献里看到的最快的贴壁是在传代2个小时以后。
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问
invasion assay之后细胞总是在膜边缘一圈
balalaLy
有没有可能是铺胶的时候量太少了?导致边缘的胶比较少,细胞容易穿过去?
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问
DNA提取物多久会失效呢?如唾液。应该如何有效保存呢?
生如夏花zzh
如果条件允许的话,建议-80冰箱保存。
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问
提取细胞的DNA后进行PCR,然后进行电泳,出现了非特异性的条带,可能的原因?
迟C迟
非特异性条带的出现跟引物特异性不高直接相关,建议重新设引物,或者多看文献,看别人发表的用的什么引物。
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问
DNA跑胶后条带弥散的原因?
bamboopiggy
dna降解了?胶配的不匀?用的buffer有问题?这些都是可能的,你要一项一项的排除。
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问
DNA提取过程中内源性核酸酶如何有效抑制?
lyang556
在提取内源核酸酶含量丰富的材料的 DNA时,可增加裂解液中螯合剂的含量,细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔。
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问
最近贴壁细胞传代,胰酶消化到光镜下细胞脱落到大片成团终止消化,吹打离心重悬,但传好的培养瓶里总是有成团的细胞没散开,是什么原因呀
whilt-shirt
这种情况一般是没有完全吹散,建议反复多次吹打
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问
大鼠三叉神经节在什么位置?
dxywode
你可以参考一下文献,希望对你有帮助。
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问
发现细胞里有一些小的团块 贴壁不知道是不是污染了?
Keven轩
应该是真菌污染,及时扔掉然后清洗培养箱
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问
真菌DNA提取时能否患酶呢
dxywode
用CTAB法非常好,不用酶类,而且效果很好,我就是用这个提的。
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问
细胞真菌污染怎么避免,如果已经污染了,通过pbs洗有用么
未来9
真菌污染预防方法:1),将细胞移出来,用微量硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盘里加适量硫酸铜或者酸氢二钠高盐液体防止霉菌2)孵箱应定期清洁,大约一个月左右清洁一次,3)可在培养基里加两性霉素或制霉菌素)或[放线菌素D或双抗进行预防。4)最主要的还是要培养良好的无菌观念,实验室尽量不要大声说话,佩戴好口罩,手套,操作时应小心,避免培养基撒入培养箱以及生物安全柜,这些撒入培养箱的培养基为细菌及真菌的
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问
MKN45细胞不太好消化,大约消化多长时间才合适,如果消化损失过多会导致污染么
dxywode
消化我一般都胰酶在37°消化4分钟后,才能消化下来。就只能这么养,现在已经传了好多代。
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问
细胞培养过程中如何保持细胞的低分化状态?
未来9
动物的细胞在细胞培养过程中只能增殖不能分化,在实验室养了无数次细胞,既不会分化,也不会无限增值,正常50代左右。癌细胞可无限增殖,但也不会分化。 动物细胞的培养有各种用途,一般而言,动物细胞培养不需经过脱分化过程
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问
内质网分离的条件,速度和时间是多少呀?
dxywode
如果只是从内质网中提蛋白的话,你超3到4个5s左右就行了,其实如果用比较强的lysis组合,不用超声,votex估计也差不多了.
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问
为什么rna酶活性稳定,很难被破坏,煮沸,高压灭菌都不能破坏它?
bamboopiggy
RNase,尤其是属于 RNase A 家族的那些,是相当小的、紧凑的蛋白质,含有几个半胱氨酸残基,可形成许多分子内二硫键]。 因此,变性的 RNase 在没有变性剂的情况下冷却至室温后往往会恢复其天然结构和部分功能。在冻融循环甚至高压灭菌后,RNases 可以保留大量活性。
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问
DNA的提取过程中不小心加入其他物质,那DNA的结果会有所不同吗?会有差错吗?
Topmicro
需要看你加入了什么物质,是否会降解DNA?是否会影响DNA的溶解度?在哪一步加入的?具体物质需要具体分析。
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问
做双酶切原本质粒大小3400多bp,两酶切位点之间的片段40多bp,为什么切下来跑胶只有2000多bp,不应是3000多bp么?
dxywode
提得好的质粒应该绝大部分是超螺旋的,跑得比marker的线性条带快。如果你5K的质粒真跑到5K的位置,才是没提好呢。想确定质粒的分子量最简单的办法是用单酶切成线性分子,再和marker比较。
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问
构建好的载体双酶切后,出现四条带,有哪位大佬知道什么原因吗?
天一湖医者
有没有注意到这四条带分别有多大,有两条带肯定是你的载体和目的片断,其余两条是什么就不清楚。也有可能是污染,或者是质粒提取出现问题,你的质粒有没有问题。
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问
请问大肠杆菌DH5Α和XL1BLUE质粒承载力有多少?
bamboopiggy
说明书上说的是10^8 cfu/ug的DNA,它是用puc19质粒测试的。
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问
细胞冻存液怎样配置,不同的配方有什么区别吗?
bamboopiggy
只要有血清,有5-10%的dmso,每个实验室的配方都不太一样。有的喜欢直接血清加dmso,有的是完全培养基血清dmso,有的认为完全培养基里有双抗。提议用单纯培养基加血清加dmso,看实验习惯,其实只要能复苏活了,哪种都行
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