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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
DNA跑胶后条带弥散的原因?
bamboopiggy
dna降解了?胶配的不匀?用的buffer有问题?这些都是可能的,你要一项一项的排除。
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问
DNA提取过程中内源性核酸酶如何有效抑制?
lyang556
在提取内源核酸酶含量丰富的材料的 DNA时,可增加裂解液中螯合剂的含量,细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔。
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问
最近贴壁细胞传代,胰酶消化到光镜下细胞脱落到大片成团终止消化,吹打离心重悬,但传好的培养瓶里总是有成团的细胞没散开,是什么原因呀
whilt-shirt
这种情况一般是没有完全吹散,建议反复多次吹打
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问
大鼠三叉神经节在什么位置?
dxywode
你可以参考一下文献,希望对你有帮助。
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问
发现细胞里有一些小的团块 贴壁不知道是不是污染了?
Keven轩
应该是真菌污染,及时扔掉然后清洗培养箱
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问
真菌DNA提取时能否患酶呢
dxywode
用CTAB法非常好,不用酶类,而且效果很好,我就是用这个提的。
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问
细胞真菌污染怎么避免,如果已经污染了,通过pbs洗有用么
未来9
真菌污染预防方法:1),将细胞移出来,用微量硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盘里加适量硫酸铜或者酸氢二钠高盐液体防止霉菌2)孵箱应定期清洁,大约一个月左右清洁一次,3)可在培养基里加两性霉素或制霉菌素)或[放线菌素D或双抗进行预防。4)最主要的还是要培养良好的无菌观念,实验室尽量不要大声说话,佩戴好口罩,手套,操作时应小心,避免培养基撒入培养箱以及生物安全柜,这些撒入培养箱的培养基为细菌及真菌的
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问
MKN45细胞不太好消化,大约消化多长时间才合适,如果消化损失过多会导致污染么
dxywode
消化我一般都胰酶在37°消化4分钟后,才能消化下来。就只能这么养,现在已经传了好多代。
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问
细胞培养过程中如何保持细胞的低分化状态?
未来9
动物的细胞在细胞培养过程中只能增殖不能分化,在实验室养了无数次细胞,既不会分化,也不会无限增值,正常50代左右。癌细胞可无限增殖,但也不会分化。 动物细胞的培养有各种用途,一般而言,动物细胞培养不需经过脱分化过程
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问
内质网分离的条件,速度和时间是多少呀?
dxywode
如果只是从内质网中提蛋白的话,你超3到4个5s左右就行了,其实如果用比较强的lysis组合,不用超声,votex估计也差不多了.
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问
为什么rna酶活性稳定,很难被破坏,煮沸,高压灭菌都不能破坏它?
bamboopiggy
RNase,尤其是属于 RNase A 家族的那些,是相当小的、紧凑的蛋白质,含有几个半胱氨酸残基,可形成许多分子内二硫键]。 因此,变性的 RNase 在没有变性剂的情况下冷却至室温后往往会恢复其天然结构和部分功能。在冻融循环甚至高压灭菌后,RNases 可以保留大量活性。
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问
DNA的提取过程中不小心加入其他物质,那DNA的结果会有所不同吗?会有差错吗?
Topmicro
需要看你加入了什么物质,是否会降解DNA?是否会影响DNA的溶解度?在哪一步加入的?具体物质需要具体分析。
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问
做双酶切原本质粒大小3400多bp,两酶切位点之间的片段40多bp,为什么切下来跑胶只有2000多bp,不应是3000多bp么?
dxywode
提得好的质粒应该绝大部分是超螺旋的,跑得比marker的线性条带快。如果你5K的质粒真跑到5K的位置,才是没提好呢。想确定质粒的分子量最简单的办法是用单酶切成线性分子,再和marker比较。
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问
构建好的载体双酶切后,出现四条带,有哪位大佬知道什么原因吗?
天一湖医者
有没有注意到这四条带分别有多大,有两条带肯定是你的载体和目的片断,其余两条是什么就不清楚。也有可能是污染,或者是质粒提取出现问题,你的质粒有没有问题。
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问
请问大肠杆菌DH5Α和XL1BLUE质粒承载力有多少?
bamboopiggy
说明书上说的是10^8 cfu/ug的DNA,它是用puc19质粒测试的。
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问
细胞冻存液怎样配置,不同的配方有什么区别吗?
bamboopiggy
只要有血清,有5-10%的dmso,每个实验室的配方都不太一样。有的喜欢直接血清加dmso,有的是完全培养基血清dmso,有的认为完全培养基里有双抗。提议用单纯培养基加血清加dmso,看实验习惯,其实只要能复苏活了,哪种都行
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问
请问提取蛋白原液第一天测BCA后忘记放负80冰箱,4度冰箱过夜,担心蛋白降解,第二天重新测BCA,为什么有的样本蛋白浓度反而升高
whilt-shirt
BCA法本来就存在误差,你这个只能说是误差,并不能说是升高了
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问
在含DNA的滤液中加入嫩肉粉与将含DNA的滤液中放在60~75℃的恒温水浴箱中保温10~15min的原理有什么不同?
bamboopiggy
一个是化学性的,利用嫩肉粉中的木瓜蛋白酶,酶解去除蛋白质。一个是物理性的,利用DNA和蛋白质变性的温度差,将蛋白质变性,而不影响DNA。两者都是为了去除蛋白质。
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问
对提取出的人的全基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳,胶孔总会很亮,仿佛有DNA的残留,未完全跑下来,为什么?
天一湖医者
主要从以下两个方面考虑:1、PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物
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问
蛋白原液做完BCA放在4度过夜了,第二又测了一次BCA,结果如图,这批蛋白还能用么?
balalaLy
肯定是有降解的。BCA测浓度只是相对定量。跟BCA试剂的作用时间和作用温度很大关系。只能同一时间点测的样品间做比较,前后两次的只能看个大概。跑wb的话应该也是可以跑出来的,你就跑跑看呗。结果符合预期就当做一次重复实验呗。
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