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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
huh7 细胞培养时应该注意些什么啊?我每次复苏传3-4代就开始状态不好。
balalaLy
新复苏后每次传代传密一点,太疏了长不好。刚开始那几天可以勤一点换液。
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问
请问为什么提取RNA的时候最后没有看到羽毛状沉淀呢?
bamboopiggy
可能你rna的浓度有点低,所以并且那个沉淀是透明的,如果太小了,你可以能看不到,没事,能用就好
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问
CRISPR/CAS9质粒提取?
天一湖医者
要是你不进行高压灭菌,在那些离心管和枪头中的细菌的DNA可能进入你提取的DNA中,污染你的DNA,造成DNA检测出现错误。
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问
CRISPR/ CAS9 TOP10?
balalaLy
氨苄浓度用100,gelred和goldview都用过,没看出有什么不同的
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问
什么时候进行细胞传代
生如夏花zzh
一般长到80-90即可传代,太满了会影响细胞活力
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问
农杆菌可以提质粒吗?
天一湖医者
农杆菌可以提质粒。和从大肠杆菌中的一样,260/280应在2.0左右。260/230应该大于2。
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问
请问提取植物DNA时如何有效的去除酚类和多糖物质
bamboopiggy
取植物材料研磨后加入核酸分离缓冲液和2-巯基乙醇,混匀后置水浴中;离心机中离心后弃上清;加入1×PBS溶液,研磨仪上震荡混匀,离心后弃上清;向沉淀中加入预热的3×CTAB裂解液并混匀,水浴裂解;加等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀,离心;取上清,加入等体积氯仿/异戊醇混合液,混匀,离心;取上清,加入NaCl和冰异丙醇,混匀,沉淀1~3小时;取出离心后,将沉淀用乙醇洗涤,风干后加TE溶解,即完成提取
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问
成骨诱导液加入后,细胞周围有析出晶体是怎么回事?
汤姆卜丽波
可能是磷酸盐析出结晶,在培养箱养一段时间看看,细胞形态变了么
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问
生信结论与临床/基础实验不符合如何解释?
bamboopiggy
生信是基于RNA-SEQ的,是RNA水平的,但是你临床结果是直接看的蛋白水平的,有时候会存在转录水平和蛋白水平不一致的,以能发生疾病的蛋白水平为准。
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问
广州哪个实验室有液压机可以借用?
未来9
这个你可以询问有类似经验的师兄师姐,看看有什么渠道
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问
大家做dapi染色常用浓度是多少,0.5-10ug/ml的范围太广了
balalaLy
dapi可以透过完整的细胞膜,跟DNA的结合能力很强,大多数细胞0.1ug/ml就能染上。浓度低一点可以适当延长染色时间,浓度高一点就缩短一下时间,以免过曝。
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问
基因组得率比较低,怎么提高?
whilt-shirt
更换进口的成品试剂盒,基本上得率都还可以
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问
我再提DNA的时候,A230比值的吸光度老是过低,重复了好多遍都这样,1.0左右,有什么解决方法吗
生如夏花zzh
纯化不好 可能需要更换试剂盒再试试看
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问
什么情况下需要包被培养板和培养瓶?
balalaLy
一般根据细胞特性或者实验目的考虑要不要包被以及用什么包被。比如我做乳鼠神经元原代培养要用多聚赖氨酸包被,耳蜗基底膜原代培养要用鼠尾胶包被。
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问
样品几丁质含量过多,会不会影响DNA的提取?
汤姆卜丽波
如果过多的话。是会影响的。多糖的污染是提取核酸时常遇到的一个棘手的问题。植物组织中往往富含多糖,而多糖的许多理化性质与核酸很相似,因此很难将它们分开。在去除多糖的同时核酸也被裹携走了,造成核酸得率的减少;而在沉淀核酸时,也产生多糖的凝胶状沉淀,这种含有多糖的核酸沉淀难溶于水,或溶解后产生粘稠状的溶液。由于多糖可以抑制许多酶的活性,因此污染了多糖的核酸样品无法用于进一步的分子生物学研究。所以必须去除
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问
质粒提取过程中的问题?
天一湖医者
首先确定下做阳性重组子鉴定的时候是否是两条带,如果是单一条带的话,也有可能出现空载体的情况,有可能是空载体的片段段量小,不易观察
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问
STC-1细胞传代后多久贴壁
天一湖医者
文献里看到的最快的贴壁是在传代2个小时以后。
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问
invasion assay之后细胞总是在膜边缘一圈
balalaLy
有没有可能是铺胶的时候量太少了?导致边缘的胶比较少,细胞容易穿过去?
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问
DNA提取物多久会失效呢?如唾液。应该如何有效保存呢?
生如夏花zzh
如果条件允许的话,建议-80冰箱保存。
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问
提取细胞的DNA后进行PCR,然后进行电泳,出现了非特异性的条带,可能的原因?
迟C迟
非特异性条带的出现跟引物特异性不高直接相关,建议重新设引物,或者多看文献,看别人发表的用的什么引物。
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