huh7 细胞培养时应该注意些什么啊？我每次复苏传3-4代就开始状态不好。

新复苏后每次传代传密一点，太疏了长不好。刚开始那几天可以勤一点换液。

消化的时候掌握好时间，避免过度损伤。

1）：传代密度不宜过高也不易过低，一般1瓶传3瓶可能比较合适。

2）：培养液应该适当偏酸性，在7.0-7.2之间比较好。一般加上HEPES后，pH值是不用调的。

3）：细胞代数越高生长越快，同时性状和原代差别也更大。一般2-3天传代一次比较合适。

4）：传代时细胞密度在80%左右比较好，如果超过90%融合再传会影响细胞状态。

huh7 对血清比较挑，你用好点的血清试试