免疫组化背景很脏是什么原因啊？

  这里要清楚一点，背景脏不一定是因为仪器不干净造成的，也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的，有可能是以下的环节出了问题：1、实验准备提取蛋白所需的研磨器材，以及制胶的玻璃板、梳子要清洗干净;若长期不使用，建议器材在实验前再行清洗一次以杜绝相应的污染。2、提取蛋白选择合适的蛋白裂解液，充分去除一些干扰因素，比如核酸，多糖，脂类等; 建议蛋白在测量浓度后变性分装保存，避免反复冻融使蛋白发生降解;注意Loading buffer在保质期内，蛋白加入Loading buffer后充分混匀，再煮沸变性 3、制胶玻璃板夹紧之后，有些人习惯性加水试一下是否漏胶，建议用蒸馏水而不是自来水测试，测试结束后要将玻璃板之间的水倒干净，用滤纸吸干残留的水;灌胶之前要将配好的试剂充分混匀，灌胶的过程中要掌握好速度，缓慢加入，避免产生气泡灌注好分离胶后，缓缓加入无水乙醇封胶，该步操作时速度一定要慢，防止胶面被冲变形;在等待分离胶凝固的过程中，不要总去摇晃观察；温度较高的情况下，30min左右就会凝固，冬天气温较低可能需要较长时间；若分离胶液面不平，会影响后期蛋白电泳的效果。

除了抗体的问题还有可能是抗原修复液的原因，选合适的修复液，优化一下修复时间

一二抗的浓度，抗体的特异性

封闭和清洗

ihc疏水笔圈好防止不均和干片

跟着SOP做

1）抗体浓度过高：一抗浓度过高是使用新抗体前工作浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。（2）抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是，严格执行操作规程，最好随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的时间不是传统的1小时，而是30分钟，因此，要根据染色结果进行调整。