实验问答21,889,147 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问肺癌细胞造的转移模型，用什么抗体指标做免疫组化还是免疫荧光可以确定转移部位的细胞

你好几和户

F1，TTF1阳性代表的是肺来源，KI67是主要看增长指数，其他HER2，KRAS或者P53、CK都证明来源。

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问CDX-Hep3B，有人做过吗？

bamboopiggy

hep3B是肝癌细胞系，可能这个细胞系促血管生成，所以成的瘤都是血，你需要换个细胞系做了。

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问关于毒理学实验每组小鼠的数量的设置问题

bamboopiggy

是太少，一般要求每组最少要五只。

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问学习睾丸网注射腺病毒，有做过的同学知道睾丸网注射的具体位置和技巧吗？

府宅

小鼠睾丸注射的实验步骤:1.麻醉小鼠:40-80mg/kg，注射时浓度一般为0.5%，腹腔注射。2.调节显微操作台的操作臂，将玻璃针尾部用打火机熏烤一下，装进操作臂内，旋好固定旋钮。3.小鼠昏迷后，用胶带固定四肢于硬纸板上。4.备皮:剪去小鼠腹部的毛。注意:剪下的毛妥善处理，勿污染小鼠腹腔。此步骤可不做5.开腹:逐层打开腹腔，表皮至肌层。6.将睾丸拉出腹腔:于膀胱旁边寻找与睾丸相连的脂肪垫，轻轻拖

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问tunnel凋亡试剂盒的使用

balalaLy

tunnel跟你要染的一抗二抗是两个实验，一般做tunnel都会单独做，因为不好染，假阳性多，你再加染个一抗，步骤有多了，相互影响。及时一起染，也是先染一抗二抗，后面再染tunnel

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问PBMC的CD107a检测方法

府宅

有些组织有自发荧光的，这会造成本底高

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问抗原修复后DAB无显色

申东熙老伯

背景都没有片子都白了就是脱片。抗原修复结束一定要冷却。

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问跑流式如何避免各通道之间的串色，防止串色的规则是什么

bamboopiggy

有的公司给了一张大海报，上面包括了所有抗体和颜色，你避免选择相近的就可以。

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问流失检测中多marker时荧光抗体的选择及补偿调节，真的要被补偿整懵了，看了很多原理都懂，但是实际操作还是磕磕绊绊

Eason老歌迷

没事，慢慢来，我之前刚做的时候也不太懂，对于荧光补偿的确定，需运用以上补偿的基本原理并结合特定的标本来实现。以FITC,PE双色分析为例：（1）先调节阴性对照管：将原补偿清零，首先调节电压，通过调节电压，使阴性群落在FITC和PE双阴性区。（2）FITC单染管：在理想情况下（没有荧光干扰），因检测管中不应该出现PE信号，但实际情况是在FITC与PE的双阳性区出现了荧光信号。这个信号就是PE探测器检

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问为什么IHC中用过氧化氢可以失活内源性过氧化氢酶

冷泉港蛋白

1.过量的过氧化氢3%，会氧化酶活中心具有还原性侧链的氨基酸，有半胱氨酸天冬酰胺，还有一个，这样就无法形成中间态了。酶就失活了。而且是不可逆的，形成了共价键。2.DAB显色也用过氧化氢啊？其浓度是0.03%，一百倍的差别。当然也会修饰还原性侧链，概率比较低了。3.3%的过氧化氢会修饰过氧化氢酶，当然也会修饰所要检测的抗原，这种修饰对氨基酸侧链的改变比较小；修饰的还原性侧链不一定是抗体所对的表位。

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问MyD88抑制剂TJ-M201

Eason老歌迷

如果你刚开始做，我建议你做几次预实验，探索一下这个试剂的用量，做一个cck8看看最适浓度，然后你如果想偷懒，我可以给你分享一篇最近刚看的文献“新型MyD88抑制剂及其在脓毒血症中的应用”，一篇老文章。

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问求助：为什么肺损伤模型小鼠体重一直下降？

麻黄连翘赤小豆

小鼠体重太轻了，耐受性降低，损伤模型就是会掉体重，术后的护理也很重要

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问flox/flox小鼠与KO小鼠有什么区别啊

MercyHuang

flox的意思是 flanked loxP，意思是在目的基因片段的两侧各放一个loxP位点。通常，这两个loxP位点同向排列，位于某一个外显子或者某几个连续的外显子两侧的内含子序列中。如此，由于mRNA成熟时拼接掉内含子，插入内含子中的loxP是不影响基因正常表达的。但是一但和携带Cre的小鼠品系交配，Cre蛋白表达的细胞中，Cre会识别两个loxP，并最终导致两个loxP位点之间的序列被删除。如

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问【求助】小鼠肝脏切片免疫组化染色见大量胞内异常空泡，是细胞核着色不均吗？

Eason老歌迷

可能是细胞水肿，肝脏细胞是比较规则的，你这个不规则了。一般出现圆形空洞，是脂滴浸入有机溶剂溶解后留下的空泡，你这个图我不确定。另外，你的苏木素和伊红都没染出来效果，核应该是蓝色的，然后仔细看有的肝细胞是多核的，细胞浆是粉红色的。

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问脓毒症造模成功标准？

你好几和户

一感染因素最好以感染灶、创面感染或内源性感染的形式出现．以模拟人类感染引起---系列病理生理反应的自然过程；二发病过程中血细菌培养及内毒素检测为阳性；三MODS发生距原发打击有一定的时间；四有明显的脓毒症表现，呈现高动力循环状态和持续高代谢反应；五有足够的死亡率和MODS发病率。

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问免疫组化的实验阳性很弱怎么办？

bamboopiggy

可以尝试增加一抗浓度，最好能加一个阳性对照。

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问免疫组化实验显色后必须要进行苏木素复染吗？

向日葵需要大太阳

这个是常规染色，苏木素染核更好得观察蛋白的表达位置，当然你也可以不染，但是呈现出来效果不太好

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问免疫组化实验中的抗体需要分装保存吗？

Injector2016

-最好是分装了，分装到0.6ml或PCR管里，避免反复冻融和污染

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问免疫组化实验中如何防止脱片?

bamboopiggy

1. 玻片的酸处理使用实验室常用的次强酸清洁液（重铬酸钾120g，浓硫酸200ml，蒸馏水1000ml）浸泡玻片24小时，流水充分冲洗后在用蒸馏水冲洗三遍，置于95%乙醇中浸泡12小时，取出放烘箱中烤干或自然风干。2. 黏附剂的使用目前常用的黏附剂有三种：明胶-硫酸铬钾，APES（3—氨丙基—乙氧基甲硅烷），多聚左旋赖氨酸（poly-1—lysine）（1）明胶-硫酸铬钾，这种方法十分简便实用，不

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问免疫组化，阳性和阴性有严格的界限吗？

dxy_gwrp7ndq

抗原表达必须在特定部位，有些免疫组化的定位在细胞膜，有些在细胞质，有些在细胞核，所以在特定部位阳性表明是真正阳性；如果在非特定部位阳性，或者整个切片阴性，都会判定免疫组化是阴性，或者是假阳性；

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