• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        SLC7A11过表达求助

        相关实验:基因过表达构建实验

        user-title

        皮卡丘1996

        各位老师

        我按照2μg、4μg、6μg的量依次梯度转染293T细胞,但是一直不成功,看不到什么趋势。此外我看到这个分子有两条带,应该看哪一条呢?在这里我看的是40kDa的那一条。

        图片描述

        后面三个泳道,梯度转染SLC7A11-3×flag,2、4、6μg

        wx-share
        分享

        2 个回答

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        你做了QPCR过表达确实是成功了么,然后转染时间,细胞密度尽量保持一致,看40的条带

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        有以下几点建议:

        1. SLC7A11在40kDa处显示条带,这与该蛋白的理论分子量相符,应优先检查这一条带。

        2. 梯度转染未见明显升高趋势,可能是转染效率不一致造成的。您可以检测转染对照来评估转染效率。

        3. 考虑再扩大转染剂量范围,例如0、2、4、6、8μg,并配对空载体计量,可能更能看出趋势。

        4. 确保所用抗体的特异性良好,避免检测非特异性条带。可以做抗体阻断实验或阳性对照验证。

        5. 检查转染细胞的裂解和上样量是否均匀一致。上样均匀非常重要。

        6. 优化暴露时间,获得条带信号但不过曝。

        7. 重复试验,增加技术重复,结果更可靠。

        8. 如果可能,可以做荧光定量PCR验证mRNA水平升高。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序