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        求助:NF-κB通路激活后检测靶基因

        相关实验:MARK 信号通路

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        飒风M3ON

        我现在做的是过表达NF-κB通路中的一个基因,然后qRT-PCR检测通路的靶基因。转染成功,但是IL-8和IκB-α的表达和NC组没差别。我想问问老师们有做过相关的吗?

        转染时间为48h,有考虑过转染时间的问题,但是设了时间点结果也差不多。时间节点:6h, 12h, 18h, 24h

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        3 个回答

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        理论上转染后24h即可,但需要考虑转染这个质粒后是否能够激活NF-KB?还是得需要LPS能激动剂?

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        我认为可以延长转染时间,或者增加转染剂的浓度,目前看还是没有达到转染条件

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        下面是一些可能导致这种情况发生的原因和建议:

        转染效率可能较低,导致基因过表达量不够高,无法观察到差异表达。建议优化转染条件,包括选择更高效的转染试剂、优化细胞密度、转染时间和过表达载体浓度等。

        QRT-PCR实验中可能存在一些误差或变异性,导致结果不够准确或重复性不好。建议在实验过程中注意控制实验参数,例如RNA提取、反转录、引物设计、PCR条件和数据分析等。

        可能需要更长时间才能观察到差异表达。NF-KB通路涉及多个基因和复杂的信号传递网络,可能需要更长时间才能看到影响。

        在实验设计方面可能需要进一步优化。例如,可以增加重复次数,使用更多的控制组,包括阴性对照和阳性对照,以便更好地比较实验结果。

        可能需要进行更全面的分析。除了QRT-PCR之外,可以使用其他技术,例如Western blot、免疫组化等,来确认结果。

        user-title

        飒风M3ONuser-title

        感谢各位老师的解答,重新调整之后,我做出来了。(我也不知道APP是怎么回事,看不到回答,在小程序上才看到😂)

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