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        含有多聚组氨酸标签重组蛋白纯化实验

        实验分类:

        其他实验

        最新修订时间:

        简介

        在本方案中,用重组病毒储液感染 Sf 9 细胞,在感染后 2~3 天分析。分析方案依赖于表达蛋白的天然特性。本方案仅提供一些建议步骤,但不可能包括全部。根据表达蛋白的不同特性和已有的检测试剂,筛选步骤可做相应的改变。


        内容来源于《精编分子生物学实验指南(第五版)》


        来源:丁香实验

        操作方法

        基本方案 含 6 × His 标签

        1. 用扩增的重组病毒感染适当数量的细胞(如每个 100 mm 培养皿中 5×106 细胞),MOI 为 5~10。培养 3~5 天,直到细胞出现典型的病毒感染状态。2. 用无菌吸管轻轻吹打细胞,收集细胞和上清液,转移到离心管中。3. 4℃, 1000 g 离心 10 min。如果目的蛋白为分泌性蛋白,将上清转移到新管中,进行纯化(步骤 6)。如果目的蛋白为胞内蛋白,弃上清,洗涤细胞,将细胞沉淀在

        备择方案 含 GST 标签

        1. 制备澄清的重组蛋白溶液(见基本方案步骤1~5)。2. 轻轻的重悬谷胱甘肽琼脂糖珠,将其倒入适当的层析柱中,使树脂自然沉降,柱中液体流尽,然后用 3~5 倍的 PBS 洗涤缓冲液洗柱 2 次,以去除附着的乙醇。让柱中液体流尽。3. 将澄清的重组蛋白溶液上柱,调整柱的流速至最大为 5 ml/min 每 ml 琼脂糖珠。保存每份流出液,进行 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,防止超出了谷胱甘肽的结合能力

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