丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

求助!!用ova蛋白做SDS-PAGE跑不出条带是什么情况

相关实验:免疫组织化染色

user-title

布里啾啾迪布利多83AQ

各位大佬,请问大家有做过用ova跑SDS-PAGE蛋白电泳的实验吗

我是用的12%的分离胶,ova蛋白的浓度分别从1 mg/ml然后依次2倍稀释。结果跑出来的胶除了能看见Marker之外,ova蛋白条带一条都没有……这是什么情况啊,ova蛋白跑电泳有什么注意事项嘛请大家帮帮忙!!

wx-share
分享

4 个回答

user-title

汤姆卜丽波

有帮助

也不太可能一条都没有,是不是你操作过程中蛋白降解了

user-title

布里啾啾迪布利多83AQuser-title

但是我的蛋白是现用现配的 而且一直放在冰盒里面

user-title

bamboopiggy

有帮助

ova的分子量是45KD,一般不会跑不出来啊,你考染胶看看,如果考染能看到条带,就是你的抗体有问题了。

user-title

布里啾啾迪布利多83AQuser-title

我就是考染之后看不到条带的 没有做western

user-title

balalaLy

有帮助

最好用蛋白浓度高一点,确保蛋白量是够的,再来摸索抗体的条件。

user-title

布里啾啾迪布利多83AQuser-title

好的,感谢!但是我蛋白的浓度做到了1 mg/ml,上样量是 十微升左右,这种情况下蛋白用量应该是够的呀

user-title

你好几和户

有帮助

可能是你转膜及转膜之后的操作、试剂发生了问题。比如说你转膜的三明治没做好,转膜的电压太高,没有冰盒散热导致条带弥散,以及之后你的一抗、二抗有问题。如果是根据marker在胶上看,那我觉的你应该坚持做到最后显影、压片再说。

user-title

布里啾啾迪布利多83AQuser-title

umm我就是简单的用ova跑个蛋白电泳,不做蛋白免疫印迹 正常的话考染之后是能看见条带的,我跑其他的蛋白都有,就是ova跑不出来

ad image
提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序