布里啾啾迪布利多83AQ
各位大佬,请问大家有做过用ova跑SDS-PAGE蛋白电泳的实验吗
我是用的12%的分离胶,ova蛋白的浓度分别从1 mg/ml然后依次2倍稀释。结果跑出来的胶除了能看见Marker之外,ova蛋白条带一条都没有……这是什么情况啊,ova蛋白跑电泳有什么注意事项嘛请大家帮帮忙!!
汤姆卜丽波
也不太可能一条都没有,是不是你操作过程中蛋白降解了
布里啾啾迪布利多83AQ
但是我的蛋白是现用现配的 而且一直放在冰盒里面
bamboopiggy
ova的分子量是45KD,一般不会跑不出来啊,你考染胶看看,如果考染能看到条带,就是你的抗体有问题了。
布里啾啾迪布利多83AQ
我就是考染之后看不到条带的 没有做western
balalaLy
最好用蛋白浓度高一点,确保蛋白量是够的,再来摸索抗体的条件。
布里啾啾迪布利多83AQ
好的,感谢!但是我蛋白的浓度做到了1 mg/ml,上样量是 十微升左右,这种情况下蛋白用量应该是够的呀
你好几和户
可能是你转膜及转膜之后的操作、试剂发生了问题。比如说你转膜的三明治没做好,转膜的电压太高,没有冰盒散热导致条带弥散,以及之后你的一抗、二抗有问题。如果是根据marker在胶上看,那我觉的你应该坚持做到最后显影、压片再说。
布里啾啾迪布利多83AQ
umm我就是简单的用ova跑个蛋白电泳,不做蛋白免疫印迹 正常的话考染之后是能看见条带的,我跑其他的蛋白都有,就是ova跑不出来
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