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        用试剂盒抽质粒跑不出条带的原因分析

        互联网

        12403

        DXY网友yfq1232000问:

        今天做了一个小抽,但跑电泳时却没有条带,我抽过多次质粒,应该不会抽不出来,我考虑是不是菌液里没有我要的菌,是杂菌,但是我的LB里放了amp+,如果有杂菌的话那么也抗amp+,而一般的抗性基因都位于质粒上,而试剂盒又不仅仅是只能抽DH-5a的质粒,那么也是应该可以抽出杂菌的质粒,这样的话也是应该有条带的啊?这是为什么?

        DXY网友heartips回复:

        1、小抽你用的是试剂盒还是自已配的试剂?溶液2要现用现配,保存一般不能超过1个月。

        2、操作要小心,特别是乙醇沉淀后,一不小心沉淀就会被吸走。

        3、细菌量要够,浓度也要大。

        4、电泳marker是不是跑出来了,确定电泳没有问题。我好几次是因为EB不好看不到条带。

        DXY网友iceangletree回复:杂菌污染也会导致质粒提取质量和产量均减低,在这样的情况下只有把保存的菌划板,挑单克隆,重新摇菌来抽提。

        楼主回复:好像因为沉淀吸出来了一点,又重新抽了,抽出来了。

        DXY网友nancy5476问:我抽质粒的时候用的是试剂盒,经常会有杂蛋白被我抽出,该怎么处理这个问题啊?

        暂无人作答

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