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        构建重组质粒筛选蓝白班,没有蓝色菌落

        相关实验:分子生物学实验

        user-title

        Smile-li

        构建的重组质粒筛选蓝白斑,但是只有白色菌落没有蓝色菌落,是X-gal和IPTG的浓度不对吗?X-gal是商品化的,配置的是100ml LB平板,X-gal储存浓度为20mg/ml,加入250微升,IPTG是420微升

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        4 个回答

        user-title

        dxy_n4jex0k8

        有帮助

        重组效率高就没有蓝色啊。可以做个菌落pcr看看,如果都有目的条带就是重组率高。我们实验室都不做蓝白斑,仅是抗性筛选,做菌p二次筛选。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        是不是你插入片段连接的效率比较高,所以全部都连接上了呢?所以没有蓝色的?

        user-title

        Smile-liuser-title

        有的白色菌落提取质粒PCR鉴定是未发生重组的

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        应该是配方不太对,我们是x-gal和IPTG 7:3的比例涂布平板然后再接种的,也有可能是重组体的问题

        user-title

        Smile-liuser-title

        谢谢

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地破坏α片段的编码,使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。我感觉是你xcal浓度有问题。

        user-title

        Smile-liuser-title

        谢谢

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