• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        组织免疫沉淀中染色质的制备

        互联网

        1125

        实验步骤

         

        1.   交联

        1)   用刀片将冰冻或新鲜组织切成小块 (1-3 mm3 )。

        2)   取一个空的 15 ml 锥形离心管,称重,放入组织后再次称重,计算组织重量。

        3)   在通风橱中配制交联所用溶液。每克组织加 10 ml PBS。加入终溶度 1.5% (v/v) 的甲醛,室温旋转 15 分钟。

        4)   加入甘氨酸至终浓度 0.125M,以终止交联反应。继续室温旋转 5 分钟。

        5)   组织样本离心,4 °C 720 rpm,离心 5 分钟。

        6)   吸弃培养基,用 10 ml 冰上预冷的 PBS 洗涤。4 °C 720 rpm,离心 5 分钟,弃掉洗涤缓冲液。

        2.   组织降解

        1)   将 1 ml 枪头的末端剪掉,使吸头口增大。

        2)   50-100 mg(3-4 块)的组织用 1ml PBS 重悬。

        3)   将溶液加入锥形研磨管中,研磨 2 分钟。

        4)   将 18 号钝圆的针头连接到 1 ml 注射器上,将其插入锥形研磨管中收集细胞。将细胞加入一个锥形管中,冰上放置。

        5)   重复步骤 2.2 直到所有组织均处理完。

        6)   镜下观察细胞悬液,以确定得到的是单细胞悬液。如果需要进一步研磨,可在组织中加入更多的 PBS,重复步骤 2.2 到 2.5,直至所有组织均研磨成均一的悬液。

        7)   将细胞离心,1000 rpm, 4 °C,离心 10 分钟。估算细胞沉淀的体积以备下一步操作。

        8)   小心吸弃上清液,用FA裂解缓冲液重悬沉淀(每 1x107 个细胞加入 750 μl)。

        9)   从第 2 阶段(超声处理)开始,继续进行交联染色质免疫沉淀反应。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序