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实验问答25,161,215 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

免疫

问大鼠中酶联免疫吸附试验的血清用量是多少？

txs900416

取决于检测的目的蛋白含量和试剂盒的检测限，例如用klh免疫大鼠，测igg和igm就需要进行十倍和百倍的稀释，对照组则不用稀释；例如测血清中细胞因子，基本不用稀释，可用原液测。一般使用96孔平板加入的稀释好的样品体积为200ul。

2 回答605 围观

问柱层析纯化抗体问题解答

府宅

色谱柱填装紧与否对分离效果很有影响，若松紧不均，特别是有断层时，影响流速zhi和色带的均匀，但如果装时过分敲击，色谱柱填装过紧，又使流速太慢。影响层析柱整体渗透速度分布不均，致使色素带不是整齐的环状色素带，进而增长分离各色素的时间，应在装填层析柱前用适量的丙酮润洗一下，后在装入氧化铝时应边加边敲打层析柱使氧化铝殷实，然后用真空抽滤方法，用乙醚进行抽滤至无气泡为止。

2 回答769 围观

问重复性较差，做了两个复孔值相差太大，是什么原因？

dxywode

1、样品数量多少不一，加样时间有长有短；所以重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近。2、保温时间不一致，洗涤条件不一致，操作人员不一致；重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性。3、加样量不一致；样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。

3 回答506 围观

问花板实验终止后，整板结果呈现均一的黄色或淡黄色，或阴阳性对照、质控正常，阴性标本OD值过高。是什么原因？

dxywode

: ①整板的黄板现象可能是由于错加其他试剂造成。②酶标对吸头的污染以及对盛放显色剂容器的污染都易造成黄板现象。③孵育温度过高或孵育时间过长。④未按要求洗板，用自来水或其他公司洗液洗板，特别是洗液时每孔未注满洗液，易造成花板黄板现象。⑤阴阳性对照、质控正常，阴性标本OD 值过高的情况称为花板，一般是由于标本的收集、处理和保存方法不当，洗板不切底、显色时间延长造成。

1 回答484 围观

问Elisa测定中出现了问题，可能会有哪些原因呢

dxywode

标准曲线较差、无信号、变异系数较大

3 回答753 围观

问染色质为什么要片段化，片段化长度是多少

府宅

一般片段化的大小在200-1000bp，一般300-600bp均能获得较好的ChIP结果。如果小于200bp的话，蛋白的结合位点很有可能被打断，原因是由于每个核小体结合DNA的序列长度为175bp，加上不同核小体间的linker DNA序列，这样每个核小体结合DNA的最小序列大概在200bp左右，如果片段长度大于1000bp，您将会分离获得包含目标序列的DNA，但所要研究的蛋白可能会离您目标序列有

2 回答941 围观

问石蜡切片在染色过程中总出现脱片现象的原因是？

此用户已注销

1.多聚赖氨酸玻片质量的问题。我原先是买的，后面补做第二批时用的病理科老师自己做的片子，要好一点。2.组织切的不好，切片机的问题例如比较老的旧的机器切得厚或者不均匀，或者切片者手法不好等。3.组织的问题，我用的组织癌症的很多，越是癌症组织有坏死之类越容易脱。4.没烤好，时间短温度不够之类。

3 回答1699 围观

问流式的电压如何调，怎么样是个标准

peaceful13

先用空白细胞，让细胞压在左下角的位置，然后可以用全染管样本，看一下所有检测通道电压是否在检测范围，最终上单染管确定最终电压值

3 回答3496 围观

问双向免疫扩散实验结果问题

郭郭的郭郭

根据抗原的成份可有以下三种现象：（1）若二孔中的抗原相同，与相应抗体形成的沉淀线融合成弧形；（2）若二孔中抗原不同，当抗血清中分别含有与抗原相应的抗体时，则形成的沉淀线相交叉，也就是沉淀线弧支线；（3）若两孔中抗原部分相同，抗血清中有各相应的抗体，形成的沉淀线相切。

3 回答1430 围观

问用51cr铬酸钠标记靶细胞

dxywode

首先用培养液洗涤107靶细胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。如上用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次，每次400×g 10分钟。用50ml RPMI-1640培养液悬浮细胞，置37℃水浴30分钟，以减少非特异的自然释放。离心200×g 10分钟，去上清液。

2 回答604 围观

问免疫电泳检测粪内贾第虫抗原诊断问题

郭郭的郭郭

免疫诊断为辅助诊断，主要有酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接荧光抗体试验（IFA）和对流免疫电泳（CIE）等方法，其中ELISA简单易行，检出率高（92%～98.7%）等特点，适用于流行病学的调查。CIE可达94%，均可诊断粪内贾第虫。

3 回答576 围观

问目前有哪些成熟的技术已经应用的有哪些这些应用会人类带来哪些变化整体的发展方向是什么这其中有什么样的个人发展机会

郭郭的郭郭

机器人手术革新，机器人手术用于微创手术，有助于提高精确度，控制力和灵活性。在手术机器人帮助下，外科医生可以执行非常复杂的手术，否则这些手术非常困难或不可能执行。随着技术的改进，它可以与增强现实相结合，以允许外科医生在操作的同时实时查看患者的其他重要信息。虽然手术机器人的发明引起了人们对机器人最终将取代人类外科医生的担忧，但它很可能仅用于协助和增强外科医生的工作。

3 回答493 围观

问常用的去除内源性酶的方法是3%过氧化氢水溶液。但在含有丰富血细胞的标本中，会有气泡现象，是否有可替代去除方法呢？

郭郭的郭郭

如果采用过氧化物酶的检测系统，必须进行内源性过氧化物酶封闭处理。代替过氧化氢水溶液，加还原性物质比较好，硫代硫酸钠、亚硫酸钠、保险粉之类的。方便搞到酶的话，酶也是不错的。另外，你最好说一下水里还有什么产物，看一下对这些东西对你的产物有没有影响。降温，加入亚硫酸钠水溶液洗涤就好了，双氧水在高温情况下，对你产品看否有影响的。如果有，那就改方法，萃取出来，分相，再去亚硫酸钠洗涤的。

3 回答693 围观

问最多能用几种抗体去筛选t细胞？

颜渊溪桥

我觉得主要看实验目的。胸腺中的不同时期t细胞及亚型可以用cd4，cd8，，cd25等筛选。次级淋巴器官及其他组织中可用cd3画总的t, cd4-cd8等往下画，然后再根据你所需要的亚型表征去泡，比如终末耗竭 pd1+ tim3+，只要流式通道允许，没有固定限制。

3 回答393 围观

问电泳液PH没问题，电极也没插反，为什么跑不出条带？

郭郭的郭郭

这个有许多原因，跑电泳有对照吗？比如marker.如果没有就是电泳问题，如果有，你看下有没有引物二聚体，如果没有，pcr整体肯定忘加东西了，需重做，如果有，就是你pcr体系本身有问题，需要优化，或是你的引物不好，需重新设计。还有就是琼脂糖里面忘记加溴化乙锭了，这个也有可能。

3 回答516 围观

问正常人的血清免疫电泳结果：免疫球蛋白（Ig）处于阴极端，离加样孔由近及远依次顺序是什么？

郭郭的郭郭

IgM离阴极端最近，然后是IgA，最后是IgG。

4 回答600 围观

问染色细胞核不清晰是什么原因呢？

师医生说

在免疫组化染色中多使用HE染色中经常出现有细胞核的染色不清晰，1，首先要考虑是否有固定不及时及固定不完全的情况，2，细胞核着色主要是苏木素，其主要的作用要看下是否有苏木素存在结晶以及环境温度过低，3，有使用过久的苏木素染液。4，无水乙醇以及透明剂没有很好的把握时间

5 回答1092 围观

问免疫荧光背景太强怎么解决

Kimser

封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合，减少背景染色。如果背景太强，可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间。

4 回答4504 围观

问石蜡切片如何保持固定

师医生说

病理组织切片必须经过固定才能保证后续一系列的制作过程组织标本要在24小时内尽早的固定，最好是立即固定，越快越好，另外，固定液的选择要使用10%的中性缓冲福尔马林液。固定液的量必须大于标本体积的4倍以上固定的温度要保证，至少在24摄氏度及以上的环境中操作。在操作过程中，要保证酒精脱水和进水的浓度

4 回答1543 围观

问影响淋巴细胞转化的因素有哪些?

此用户已注销

⑴、受体细胞转化的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的突变株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，它可容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。另外还应根据载体的性质及实验的目的选择合适的宿主。此外，受体细胞生长状态和密度也很重要。不要使用经过多次转接或储存于4℃的培养菌。细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，密度过高或不足均会影响转化率。⑵、载体DNA和重组DNA方面载体本身性质决定了转化的

3 回答866 围观

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