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问
变性时上样缓冲液加少了,有影响吗
bamboopiggy
再补点进去,就好,问题不大。实在不放心就重新变性一下
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问
分别收集EGF刺激0分钟、5、10、30分钟的1841乳腺癌细胞,提取蛋白质,分别进行酶解,然后采用iTEAQ中的不同核素标记。
bamboopiggy
EGF刺激0分钟、5、10、30分钟的1841乳腺癌细胞中,不同时间点酪氨酸磷酸化位点的变化
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问
有什么方法能区分凋亡,坏死,焦亡吗?
bamboopiggy
分别加入凋亡,坏死和焦亡的抑制剂,看那个能rescue你的细胞,你的细胞就是哪种死亡方式。
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问
固相免疫分析时,捕获蛋白的免疫分析的亲和力可以通过哪种方式增加,怎么增加实验中蛋白的结合率?
bamboopiggy
找到合适的ph值,找到合适的蛋白浓度,做好预实验,
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问
请教一下这个免疫荧光图,这里的白色箭头指的是什么呢
bamboopiggy
你看figure legend,第一行的箭头代表 AQP5,第二行代表prospc,第三行代表 vWF 比较经典的位置。
1 回答
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问
固相抗体是怎么形成的?
bamboopiggy
将抗体连接在固相载体上,形成固相抗体。其实就是按你抗体的载体是什么
4 回答
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问
elisa结合活性实验中 酶标仪测出来的吸光度总是两边高 中间低是什么原因呢?
bamboopiggy
首先确定酶标仪没有问题,其次看你操作过程中,是不是对中间冲的比较厉害?
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问
我想知道免疫组化和ELisa 都可以测的一个指标,优先考虑哪个方法呢?
bamboopiggy
最好两种方法都做,互相验证,使结果更solid
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问
请问悬浮细胞如何做免疫荧光,如何把细胞固定在在载玻片上
未来9
细胞离心,PBS洗3遍,去除血清的影响,洗好后离心,吸弃上清,最后离心管内总共剩含细胞液体500ul左右,打匀,用转移适量至PLL处理好的载玻片上(悬浮细胞最好处理一下),用头平着推开液滴,铺平。自然风干,可以用手来回晃动,加快蒸发,建议时间稍长,15~20min左右。具体还要自己摸索一下,根据自己细胞情况,数量等调整液体量及时间。制备悬浮细胞方法同上,调整细胞数在10的6-7次方左右。PL
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问
通过免疫组化或免疫细胞化学的方法检测组织或细胞中的Bcl-2,底物颜色没有变红是因为什么?
bamboopiggy
要么你反应过程中有步骤做错了,要么是bcl2在你组织中表达量低
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问
请教各位大神,这个图要如何解读?尤其是左上的DAPI染色?
bamboopiggy
每个图上标的蛋白的颜色,和图中染的颜色是一致的,感觉你这俩蛋白在胞浆,没有和dapi重叠,但是你这俩蛋白可以共定位
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问
动物流式实验怎么设门?
异乡人hyq
一般根据散射光进行设门,即我们通常所说的前散(forward scatter, FSC)和侧散(side scatter, SSC)来设门。FSC的大小与细胞的直径成正相关,不同的细胞,细胞越大,其FSC越大;反之越小。SSC的大小与细胞内颗粒结构的质量成正相关,不同的细胞,细胞内颗粒结构越复杂,质量越大,其SSC越大;反之越小。
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问
分别收集EGF刺激0分钟、5、10、30分钟的1841乳腺癌细胞,提取蛋白质,分别进行酶解,然后采用iTEAQ中的不同核素标记。
天一湖医者
采用iTRAQ试剂中的114Da、115Da、116Da和117Da不同同位素标记。将它们等量混合,采用抗泛酪氨酸磷酸化抗体进行免疫沉淀,再经过固相金属亲和层析(Im¬mobilizedmetalaffinitychromatography,IMAC)进一步纯化,最后用LC-MS/MS。
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问
小鼠肺组织在20%蔗糖里浸泡了三四天都没下沉是怎么回事
bamboopiggy
你用蔗糖是要对肺组织脱水的,一般我们会在肺组织上戳个牙签,让肺组织沉下去
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问
做WB,跑胶的时候,有黄色的拖尾,有一个孔甚至都直接变成黄色的了,想请教一下是胶的问题还是别的什么原因
cxsm
可能是loading buffer的PH吧
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问
做MTT实验时,铺板时间太长,会对细胞有影响吗?多久时间会对细胞有影响?
cxsm
这很难说,要尽量保证细胞的生长空间和营养物质的提供
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问
如何测量DNA纳米花的浓度
bamboopiggy
通过变性凝胶电泳纯化,用紫外线吸收光谱来定量测定
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问
免疫组化实验过程中,切片背景过深是怎么回事?
bamboopiggy
降低抗体浓度,主要是二抗的浓度,在二抗孵育显色过程中,时不时的拿到镜下看看,如果觉得可以了,就停止孵育
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问
免疫组化实验中,如果所有的切片呈阴性,我们该怎么办?怎么确定不是假阴性?
Mani-F
仔细检查实验记录,确定所有步骤没出错,再用阳性对照确定抗体有没有问题,都没问题,那有可能切片就是阴性的。
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问
一抗是兔来源的抗体,二抗可以用抗山羊的二抗来匹配吗?
Mani-F
不可以用抗山羊的二抗,二抗必须用抗兔的!
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